Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Αριθμός γάτας: HCB5145A
Το Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) είναι ένα κιτ πολλαπλής ποσοτικής PCR που βασίζεται στο RNA ως πρότυπο.Στη διαδικασία του πειράματος πραγματοποιήθηκε αντίστροφη μεταγραφή και ποσοτική PCR στον ίδιο σωλήνα, γεγονός που απλοποίησε την πειραματική λειτουργία και μείωσε τον κίνδυνο μόλυνσης.Σε αυτό το κιτ, το πρώτο κλώνο cDNA συντέθηκε αποτελεσματικά από ανθεκτική στη θερμότητα Αντίστροφη Μεταγραφάση και ενισχύθηκε ποσοτικά από Πολυμεράση DNA Ετικέτας HotStart.Το κιτ περιέχει κυρίως βελτιστοποιημένο ρυθμιστικό διάλυμα MP, μείγμα ενζύμων κ.λπ. Το ρυθμιστικό διάλυμα περιέχει ήδη Mg2+και dNTP.Επιπλέον, προστίθενται οι παράγοντες που μπορούν να αναστείλουν αποτελεσματικά τη μη ειδική ενίσχυση PCR και να βελτιώσουν την αποτελεσματικότητα ενίσχυσης πολλαπλών αντιδράσεων qPCR, οι οποίοι μπορούν να εξασφαλίσουν την αποτελεσματικότητα ενίσχυσης και να πραγματοποιήσουν αντίδραση πολλαπλής ενίσχυσης.Το σύστημα dUTP/UDG προστέθηκε για να αποτρέψει αποτελεσματικά τον κίνδυνο μόλυνσης από αεροζόλ.
Συστατικά
1. Ρυθμιστικό διάλυμα
2. Μίγμα ενζύμων
Προσδιορισμός
| Hot Start | Ενσωματωμένο hot start |
| Μέθοδος ανίχνευσης | Ανίχνευση ασταριού-ανιχνευτή |
| Μέθοδος PCR | Ένα βήμα RT-qPCR |
| Πολυμεράση | Taq DNA πολυμεράση |
| Τύπος δείγματος | DNA |
Συνθήκες αποθήκευσης
Το προϊόν αποστέλλεται με ξηρό πάγο και μπορεί να αποθηκευτεί στους -25~-15℃ για 1 χρόνο.Θα πρέπει να αποφεύγεται η συχνήπάγωμα-απόψυξη.Συνιστάται η αποθήκευση χωριστά.
Οδηγίες
1.Αντίδραση Σύστημα
| Συστατικά | Όγκος (μL) | Τελική Συγκέντρωση |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Μίγμα ενζύμων | 1 | - |
| Μίγμα ασταριού/ανιχνευτή (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Πρότυπο RNA | 1-10 | - |
| Χωρίς RNase H2O | έως 25 | - |
Σημειώσεις:
Φροντίστε να ανακατέψετε καλά πριν τη χρήση, αποφύγετε τις υπερβολικές φυσαλίδες που προκαλούνται από βίαιους κραδασμούς.
ένα.Συγκέντρωση ασταριού: Μίγμα ασταριού με πολυπλεξικό αστάρι, ανάλογα με την κατάσταση η βέλτιστη συγκέντρωση ασταριού μπορεί να είναι μεταξύ 0,l και 1,0μM.
σι.Συγκέντρωση ανιχνευτή: Μίγμα ανιχνευτή συμπεριλαμβανομένης της ομάδας φθορισμού διαφοράς επισήμανσης πολυπλεξίας, ανάλογα με την κατάσταση η βέλτιστη συγκέντρωση ανιχνευτή μπορεί να είναι μεταξύ 0,05 και 0,5 μΜ.
ντο.Αραίωση προτύπου: Η qPCR είναι πολύ ευαίσθητη και συνιστάται η αραίωση του προτύπου.Η τιμή ελέγχου Ct είναι κατάλληλη μεταξύ 20 και 35.
ρε.Προετοιμασία συστήματος: Παρακαλούμε προετοιμάστε στο εξαιρετικά καθαρό τραπέζι εργασίας, και στο σιφώνιο και στο σωλήνα αντίδρασης χωρίς υπολείμματα νουκλεάσης.Συνιστάται η χρήση της κεφαλής του πιστολιού με στοιχείο φίλτρου.Αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση και τη μόλυνση από αεροζόλ.
2. Βελτιστοποιημένη ΠοδηλασίαΠρωτόκολλο
| Κύκλος βήμα | Θερμ. | χρόνος | Κύκλοι |
| Αντίστροφη μεταγραφή | 50℃ένα | 20 λεπτά | 1 |
| Αρχική-μετουσίωσης | 95℃ | 5 λεπτά | 1 |
| Αντίδραση ενίσχυσης | 95℃ | 15 δευτ |
40-45 |
| 60℃ b | 30 δευτ c |
Σημειώσεις:
ένα.Αντίστροφη μεταγραφή: Η θερμοκρασία μπορεί να επιλέξει 42°C ή 50°C.
σι.Αντίδραση ενίσχυσης: Η θερμοκρασία ρυθμίζεται σύμφωνα με την τιμή Tm των σχεδιασμένων εκκινητών.
ντο.Λήψη σήματος φθορισμού: Ρυθμίστε την πειραματική διαδικασία σύμφωνα με τις απαιτήσεις του εγχειριδίου του οργάνου.
Σημειώσεις
Φοράτε τα απαραίτητα ΜΑΠ, όπως παλτό εργαστηρίου και γάντια, για να διασφαλίσετε την υγεία και την ασφάλειά σας.
