2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Αριθμός γάτας: HCB5151A
Το SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) έχει σχεδιαστεί για να εκτελεί PCR απευθείας από δείγματα χωρίς εξαγωγή DNA ή προετοιμασία δείγματος.Αυτό το αντιδραστήριο αποτελείται από πολυμεράση DNA θερμής εκκίνησης, γλυκοζυλάση DNA ουρακίλης (UNG), αναστολέα RNase, MgCl2, dNTPs (με dUTP αντί για dTTP) και σταθεροποιητές, για ποσοτική PCR (qPCR).Αυτό το αντιδραστήριο προσχηματίζει υψηλή ανοχή σε αναστολείς, και επομένως μπορεί να εφαρμοστεί απευθείας στην ανίχνευση δειγμάτων όπως μπατονέτα λαιμού, σάλιο, αντιπηκτικό πλήρες αίμα, πλάσμα και ορός χωρίς εξαγωγή DNA.Το αντιδραστήριο χρησιμοποιεί αποκλειστικό ρυθμιστικό διάλυμα για qPCR με μικτά ένζυμα αντι-ανασταλτικής πολυμεράσης DNA και ενζύμου UNG.Ως εκ τούτου, μπορεί να επιτύχει καλή ενίσχυση των γονιδίων-στόχων σε δείγματα που περιέχουν αναστολείς και να αναστείλει την ψευδώς θετική ενίσχυση που προκαλείται από υπολειμματική PCR και ρύπανση από αεροζόλ.Αυτό το αντιδραστήριο είναι συμβατό με τα περισσότερα όργανα φθορισμού ποσοτικής PCR, όπως τα Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche και ούτω καθεξής.
Συστατικά
1. Μίγμα ενζύμου 50×SensiDirect/UNG
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Συνθήκες αποθήκευσης
Όλα τα εξαρτήματα θα πρέπει να διατηρούνται στους -20℃ για μακροχρόνια αποθήκευση και στους 4℃ για έως και 3 μήνες.Ανακατέψτε καλά μετά την απόψυξη και φυγοκεντρήστε πριν τη χρήση.Αποφύγετε τη συχνή κατάψυξη-απόψυξη.
Πρωτόκολλο Ποδηλασίας
| Βήμα | Θερμοκρασία | χρόνος | Κύκλος |
| Πέψη | 50℃ | 2 λεπτά | 1 |
| Ενεργοποίηση πολυμεράσης | 95℃ | 1-5 λεπτά | 1 |
| Αλλοιώνω την φύση | 95℃ | 10-20 | 40-50 |
| Ανόπτηση/Επέκταση | 56-64℃ | Δεκαετία 20-60 |
Οδηγίες τοποθέτησης πιπέτας
| Αντιδραστήριο | Όγκος ανά αντίδραση | Όγκος ανά αντίδραση | Τελική Συγκέντρωση |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 µL | 25 µL | 1× |
| 50×Μίγμα ενζύμου SensiDirect/UNG | 0,5 µL | 1µL | 1× |
| 25×Μίγμα Primer-Probe1, 2 | 1µL | 2 μL | 1× |
| Δείγμα3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Συνολικός όγκος | 25 μL | 50 μL | - |
1. Η τελική συγκέντρωση του αστάρι είναι συνήθως 0,2μM.Για καλύτερα αποτελέσματα, η συγκέντρωση του αστάρι μπορεί να βελτιστοποιηθεί εντός του εύρους 0,2-1μM.
2. Γενικά, η συγκέντρωση του ανιχνευτή μπορεί να βελτιστοποιηθεί εντός του εύρους από 0,1-0,3μM.Η βέλτιστη συγκέντρωση του ανιχνευτή σχετίζεται με το όργανο ενίσχυσης PCR σε πραγματικό χρόνο, τον τύπο του ανιχνευτή και τον τύπο της φθορίζουσας ουσίας σήμανσης.Ανατρέξτε στο εγχειρίδιο του οργάνου ή στις ειδικές απαιτήσεις κάθε αισθητήρα φθορισμού.
3. Διαφορετικοί τύποι δειγμάτων περιέχουν διαφορετικούς τύπους και περιεχόμενο αναστολέα και αριθμό αντιγράφων του γονιδίου στόχου.Ο όγκος του δείγματος πρέπει να λαμβάνεται υπόψη από την πραγματική συνθήκη.Κάντε μια αραίωση του δείγματος προσθέτοντας νερό χωρίς νουκλεάση ή ρυθμιστικό διάλυμα ΤΕ, εάν είναι απαραίτητο.
4. Συνιστώμενος όγκος διαφορετικών δειγμάτων:
| Δείγμα | Τόμος για ένα 50 μL αντίδραση | Ανώτατο όριο αναλογία |
| Αντιπηκτικό πλήρες αίμα | 2,5 μL | 5% |
| Πλάσμα αίματος | 15 μL | 30% |
| Ορρός | 10 μL | 20% |
| Μάκτρο λαιμού | 10 μL | 20% |
| Σάλιο | 10 μL | 20% |
Ελεγχος ποιότητας
1. Ανίχνευση λειτουργίας: ευαισθησία, ειδικότητα και επαναληψιμότητα της qPCR.
2. Χωρίς εξωγενή δραστηριότητα νουκλεάσης: καμία εξωγενής ενδονουκλεάση και ρύπανση από εξωνουκλεάση.
Σημειώσεις Προϊόντος
1. Αυτό το προϊόν χρησιμοποιεί έναν νέο τύπο DNA πολυμεράσης θερμής εκκίνησης, η οποία μπορεί να ενεργοποιηθεί σε 1-5 λεπτά. Δεδομένου ότι το ρυθμιστικό της αντίδρασης έχει βελτιστοποιηθεί, είναι πιο κατάλληλο για διπλού ή πολλαπλού φθορισμού ποσοτική PCR χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ανιχνευτή.
2. Εάν η τιμή Rn της ενίσχυσης PCR είναι πολύ χαμηλή ή η ενίσχυση αναστέλλεται προφανώς, η μείωση της ποσότητας του δείγματος, η αύξηση του όγκου αντίδρασης ή η προηγούμενη αραίωση του δείγματος μπορεί να βελτιώσει τα αποτελέσματα.
3. Η συλλογή αίματος, σάλιου, ούρων, επιχρίσματος λαιμού κ.λπ. πρέπει να ακολουθεί τις απαιτήσεις των κλινικών κριτηρίων και μπορεί να χρησιμοποιηθεί φρέσκο δείγμα για την πρόληψη της αποικοδόμησης του νουκλεϊκού οξέος.
4. Εφόσον τα διαφορετικά αμπλικόνια έχουν διαφορετική απόδοση χρήσης από το dUTP και ευαισθησία στο UNG, τα αντιδραστήρια θα πρέπει να βελτιστοποιηθούν εάν η ευαισθησία ανίχνευσης μειωθεί όταν χρησιμοποιείται σύστημα UNG.Επικοινωνήστε μαζί μας για τεχνική υποστήριξη εάν χρειάζεται.
5. Για να αποφευχθεί η ενίσχυση των προϊόντων PCR μεταφοράς μεταξύ των αντιδράσεων ενός σταδίου, απαιτείται αποκλειστική πειραματική περιοχή και πιπέτα για την ενίσχυση.Λειτουργείτε με γάντια και αλλάζετε συχνά και μην ανοίγετε το σωλήνα αντίδρασης μετά την ενίσχυση PCR.
