Multiplex qPCR Probe Premix
Αριθμός γάτας: HCB5051A
Το TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) είναι ένα προδιάλυμα για 2 × σε πραγματικό χρόνο ποσοτική ενίσχυση PCR που χαρακτηρίζεται από υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα, το οποίο έχει μπλε χρώμα και έχει την επίδραση της προσθήκης δείγματος.Αυτό το προϊόν είναι ένα προαναμεμειγμένο αντιδραστήριο 2× Mix που επιτρέπει έως και τέσσερις φθορίζουσες ποσοτικές αντιδράσεις PCR σε ένα πηγάδι αντίδρασης.Αυτό το προϊόν περιέχει τη γενετικά τροποποιημένη μέθοδο αντισωμάτων στο ένζυμο Taq εν θερμώ εκκίνησης, βελτιώνοντας σημαντικά την ευαισθησία και την ειδικότητα της ενίσχυσης.Ταυτόχρονα, αυτό το προϊόν έχει βελτιστοποιήσει σε βάθος το ρυθμιστικό διάλυμα πολλαπλών αντιδράσεων, το οποίο μπορεί να βελτιώσει την αποτελεσματικότητα ενίσχυσης της αντίδρασης και να προωθήσει την αποτελεσματική ενίσχυση προτύπων χαμηλής συγκέντρωσης.Αυτό το προϊόν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για γονότυπο και πολλαπλή ποσοτική ανάλυση.
Προσδιορισμός
| Hot Start | Ενσωματωμένο hot start |
| Μέθοδος ανίχνευσης | Ανίχνευση ασταριού-ανιχνευτή |
| Μέθοδος PCR | qPCR |
| Πολυμεράση | Taq DNA πολυμεράση |
| Τύπος δείγματος | DNA |
Συνθήκες αποθήκευσης
Το προϊόν αποστέλλεται με ξηρό πάγο και μπορεί να αποθηκευτεί στους -25~-15℃ για 2 χρόνια.
Οδηγίες
1. ΑντίδρασηΣύστημα
| Συστατικά | Όγκος (μL) | Τελική Συγκέντρωση |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Μίγμα ασταριού (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Μίγμα ανιχνευτή (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Βαφή αναφοράς Rox | 0,5 | 1× |
| Πρότυπο DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | έως 25 | - |
Σημειώσεις:Ανακατέψτε καλά πριν τη χρήση για να αποφύγετε τις υπερβολικές φυσαλίδες από το δυνατό τίναγμα.
ένα.Συγκέντρωση ασταριού: Το Primer Mix περιέχει πολλαπλά ζεύγη εκκινητών, συνήθως κάθε αστάρι σε τελική συγκέντρωση 0,2 μmol/L και μπορεί επίσης να ρυθμιστεί μεταξύ 0,1 και 0,5 μmol/L ανάλογα με την περίπτωση.
σι.Συγκέντρωση ανιχνευτή: Το μίγμα ανιχνευτή περιέχει πολλαπλούς ανιχνευτές με διαφορετικά σήματα φθορισμού και η συγκέντρωση κάθε ανιχνευτή μπορεί να ρυθμιστεί μεταξύ 50 και 250 nmol/L ανάλογα με την ειδική κατάσταση.
1.Αναφορά βαφής Rox: Χρησιμοποιείται σε όργανο ενίσχυσης PCR σε πραγματικό χρόνο, όπως το Applied Biosystems για τη διόρθωση του σφάλματος του σήματος φθορισμού που δημιουργείται μεταξύ των φρεατίων.αυτό το προϊόν δεν περιέχει αναφορά βαφής Rox.Το Cas#10200 συνιστάται εάν χρειάζεται.
2.Αραίωση προτύπου: Το qPCR είναι εξαιρετικά ευαίσθητο και συνιστάται η αραίωση του προτύπου για χρήση.Εάν το πρότυπο είναι μητρικό διάλυμα cDNA, ο όγκος του προτύπου δεν πρέπει να υπερβαίνει το 1/10 του συνολικού όγκου.
3.Σύστημα αντίδρασης: Συνιστώνται 25μL, 30μL ή 50 μL για να διασφαλιστεί η αποτελεσματικότητα και η επαναληψιμότητα της ενίσχυσης του γονιδίου στόχου.
4.Προετοιμασία συστήματος: Παρακαλούμε προετοιμαστείτε στον εξαιρετικά καθαρό πάγκο και χρησιμοποιήστε τις μύτες και τους σωλήνες αντίδρασης χωρίς υπολείμματα νουκλεάσης.Συνιστάται η χρήση των άκρων με φυσίγγια φίλτρου.Αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση και τη μόλυνση από αεροζόλ.
2.Πρόγραμμα αντίδρασης
| Βήμα κύκλου | Θερμ. | χρόνος | Κύκλοι |
| Αρχική-μετουσίωσης | 95 ℃ | 5 λεπτά | 1 |
| Μετουσίωσης | 95 ℃ | 15 δευτ | 45 |
| Ανόπτηση/Επέκταση | 60 ℃ | 30 δευτ |
Σημειώσεις:
1.Ανόπτηση/Επέκταση: Η θερμοκρασία και ο χρόνος μπορούν να ρυθμιστούν κατάλληλα σύμφωνα με τη σχεδιασμένη τιμή του ασταριού Tm.
2.Λήψη σήματος φθορισμού: Ο χρόνος λήψης σήματος φθορισμού που απαιτείται για διαφορετικά όργανα ανίχνευσης qPCR είναι διαφορετικός, ρυθμίστε σύμφωνα με το ελάχιστο χρονικό όριο.Ο χρόνος πολλών κοινών οργάνων ορίζεται ως εξής:
20 δευτερόλεπτα: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 δευτ.: Applied Biosystems 7300
32 δευτ.: Applied Biosystems 7500
Σημειώσεις
Φορέστε τα απαραίτητα ΜΑΠ, όπως παλτό εργαστηρίου και γάντια, για να διασφαλίσετε την υγεία και την ασφάλειά σας!
