Robustart Taq DNA Polymerase

Η Robustart Taq DNA Polymerase είναι μια πολυμεράση DNA θερμής εκκίνησης.Αυτό το προϊόν μπορεί όχι μόνο να αναστείλει καλύτερα τη μη ειδική αντίδραση που προκαλείται από τη μη ειδική ανόπτηση των εκκινητών ή τη συσσωμάτωση εκκινητών στη διαδικασία προετοιμασίας και ενίσχυσης του συστήματος PCR.Ως εκ τούτου, έχει εξαιρετική ειδικότητα και είναι πιο αποτελεσματικό για την ενίσχυση προτύπων χαμηλής συγκέντρωσης και είναι κατάλληλο για αντίδραση πολλαπλής ενίσχυσης PCR.Επιπλέον, αυτό το προϊόν έχει πολύ καλή δυνατότητα εφαρμογής και μπορούν να ληφθούν σταθερά αποτελέσματα ενίσχυσης σε διαφορετικούς τύπους αντιδράσεων PCR.

Συστατικά

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase

2.10 × PCR Buffer II (χωρίς Mg²+) (προαιρετικό)

3.25 mM MgCl₂(προαιρετικός)

* 10 × PCR Buffer II (χωρίς Mg²+) δεν περιέχει dNTP και Mg²+, προσθέστε dNTPs και MgCl₂κατά την προετοιμασία του συστήματος αντίδρασης.

Προτεινόμενες Εφαρμογές

1.Γρήγορη ενίσχυση.

2.Πολλαπλή ενίσχυση.

3.Άμεση ενίσχυση αίματος, επιχρισμάτων και άλλων δειγμάτων.

4.Ανίχνευση αναπνευστικών ασθενειών.

Κατάσταση Αποθήκευσης

-20°C για μακροχρόνια αποθήκευση, πρέπει να αναμειγνύεται καλά πριν από τη χρήση, να αποφεύγεται η συχνή κατάψυξη-απόψυξη.

*Αν σημειωθεί κατακρήμνιση μετά την κατάψυξη, είναι φυσιολογικό.συνιστάται η εξισορρόπηση σε θερμοκρασία δωματίου πριν από την ανάμειξη και τη χρήση.

Ορισμός μονάδας

Μία ενεργή μονάδα (U) ορίζεται ως η ποσότητα ενζύμου που ενσωματώνει 10 nmol δεοξυριβονουκλεοτιδίου σε αδιάλυτο στο οξύ υλικό στους 74°C για 30 λεπτά χρησιμοποιώντας ενεργοποιημένο DNA σπέρματος σολομού ως εκμαγείο/εκκινητή.

Ελεγχος ποιότητας

1.SDS-PAGE ηλεκτροφορητική καθαρότητα μεγαλύτερη από 98%.

2.Ευαισθησία ενίσχυσης, έλεγχος batch-to-batch, σταθερότητα.

3.Καμία εξωγενής δραστηριότητα νουκλεάσης, καμία εξωγενής ενδονουκλεάση ή μόλυνση από εξωνουκλεάση

Οδηγίες

Ρύθμιση αντίδρασης

Σημειώσεις:

1) α.Το buffer δεν περιέχει dNTP και Mg²+, προσθέστε dNTPs και MgCl₂κατά την προετοιμασία του συστήματος αντίδρασης.

2) β.Εάν χρησιμοποιείται για qPCR/qRT-PCR, θα πρέπει να προστεθούν φθορίζοντες ανιχνευτές στο σύστημα αντίδρασης.Συνήθως, μια τελική συγκέντρωση ασταριού 0,2 μΜ θα δώσει καλά αποτελέσματα.Εάν η απόδοση της αντίδρασης είναι κακή, η συγκέντρωση του εκκινητή μπορεί να ρυθμιστεί στην περιοχή 0,2-1 μM.Η συγκέντρωση του ανιχνευτή συνήθως βελτιστοποιείται στην περιοχή 0,1-0,3 μΜ.Μπορούν να πραγματοποιηθούν πειράματα βαθμίδωσης συγκέντρωσης για να βρεθεί ο καλύτερος συνδυασμός εκκινητή και ανιχνευτή.

Πρωτόκολλο θερμικού κύκλου

Σημειώσεις

1.Ο ρυθμός ενίσχυσης της ταχείας πολυμεράσης DNA δεν πρέπει να είναι μικρότερος από 1 kb/10 s.Ο ρυθμός αύξησης και πτώσης θερμοκρασίας, ο τρόπος ελέγχου θερμοκρασίας και η απόδοση θερμικής αγωγιμότητας διαφορετικών οργάνων PCR ποικίλλουν πολύ, επομένως συνιστάται η βελτιστοποίηση των βέλτιστων συνθηκών αντίδρασης για το συγκεκριμένο όργανο γρήγορης PCR.

2.Το σύστημα είναι εξαιρετικά προσαρμόσιμο, με υψηλότερη ειδικότητα και ευαισθησία.

3.Κατάλληλο για χρήση ως αντιδραστήρια ανίχνευσης PCR υψηλής ευαισθησίας και μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε αντιδράσεις πολλαπλής ενίσχυσης PCR.

4.5'→3' δραστικότητα πολυμεράσης, 5'→3' δραστικότητα εξωνουκλεάσης.καμία δραστηριότητα εξωνουκλεάσης 3'→5'.καμία λειτουργία διόρθωσης.

5.Κατάλληλο για ποιοτικές και ποσοτικές δοκιμές PCR και RT-PCR.

6.Το 3' άκρο του προϊόντος PCR είναι Α, το οποίο μπορεί να κλωνοποιηθεί απευθείας σε ένα φορέα Τ.

7.Η μέθοδος τριών σταδίων συνιστάται για εκκινητές με χαμηλές θερμοκρασίες ανόπτησης ή για ενίσχυση θραυσμάτων μεγαλύτερα από 200 bp.