Κιτ γονότυπου ποντικιού

Αριθμός γάτας: HCR2021A

Αυτό το προϊόν είναι ένα κιτ σχεδιασμένο για την ταχεία ταυτοποίηση γονοτύπων ποντικού, συμπεριλαμβανομένης της εξαγωγής ακατέργαστου DNA και του συστήματος ενίσχυσης PCR.Το προϊόν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για ενίσχυση PCR απευθείας από την ουρά, το αυτί, τα δάχτυλα του ποδιού και άλλους ιστούς ποντικού μετά από απλή διάσπαση με ρυθμιστικό διάλυμα λύσης και πρωτεϊνάση k.Χωρίς ολονύκτια πέψη, εκχύλιση φαινόλης-χλωροφόρμιου ή καθαρισμό στήλης, κάτι που είναι απλό και συντομεύει τη χρονοβόρα διάρκεια των πειραμάτων.Το προϊόν είναι κατάλληλο για ενίσχυση θραυσμάτων στόχου έως 2kb και πολυπλεξικές αντιδράσεις PCR με έως και 3 ζεύγη εκκινητών.Το 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix περιέχει γενετικά τροποποιημένη DNA πολυμεράση, Mg²⁺, dNTPs και ένα βελτιστοποιημένο σύστημα ρυθμιστικού διαλύματος για την παροχή υψηλής απόδοσης ενίσχυσης και ανοχής αναστολέα, έτσι ώστε οι αντιδράσεις PCR να μπορούν να πραγματοποιηθούν με την προσθήκη μήτρας και εκκινητών και την επανυδάτωση του προϊόντος στο 1×.Το προϊόν PCR που ενισχύεται με αυτό το προϊόν έχει μια προεξέχουσα βάση «Α» στο άκρο 3′ και μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας για κλωνοποίηση ΤΑ μετά τον καθαρισμό.

Συστατικά

Συνθήκες αποθήκευσης

Τα προϊόντα πρέπει να φυλάσσονται στους -25~-15℃ για 2 χρόνια.Μετά την απόψυξη, το ρυθμιστικό διάλυμα Lysis μπορεί να αποθηκευτεί στους 2~8℃ για βραχυπρόθεσμη πολλαπλή χρήση και να αναμειχθεί καλά όταν χρησιμοποιείται.

Εφαρμογή

Αυτό το προϊόν είναι κατάλληλο για ανάλυση νοκ-άουτ ποντικιού, διαγονιδιακή ανίχνευση, γονότυπο και ούτω καθεξής.

Χαρακτηριστικά

1.Απλή λειτουργία: δεν χρειάζεται εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.

2.Ευρεία εφαρμογή: κατάλληλο για άμεση ενίσχυση διαφόρων ιστών ποντικιού.

Οδηγίες

1.Απελευθέρωση γονιδιωματικού DNA

1) Παρασκευή του λύματος

Το προϊόν λύσης ιστού παρασκευάζεται σύμφωνα με τον αριθμό των δειγμάτων ποντικών που πρόκειται να λυθούν (το κυτταρόλυμα ιστού πρέπει να παρασκευάζεται επί τόπου σύμφωνα με τη δόση και να αναμιγνύεται καλά για χρήση) και η αναλογία των αντιδραστηρίων που απαιτείται για ένα μόνο δείγμα είναι η εξής:

2) Παρασκευή δείγματος και λύση

Συνιστώμενη χρήση ιστού

Πάρτε μια κατάλληλη ποσότητα δειγμάτων ιστού ποντικιού σε καθαρούς φυγοκεντρικούς σωλήνες, προσθέστε 200μL φρέσκου κυτταρολύματος σε κάθε σωλήνα φυγοκέντρησης, ανακινήστε και ανακινήστε, στη συνέχεια επωάστε στους 55℃ για 30 λεπτά και μετά θερμάνετε στους 98℃ για 3 λεπτά.

3) Φυγοκέντρηση

Ανακινήστε καλά το προϊόν λύσης και φυγοκεντρήστε στις 12.000 rpm για 5 λεπτά.Το υπερκείμενο μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως εκμαγείο για ενίσχυση PCR.Εάν το πρότυπο χρειάζεται για αποθήκευση, μεταφέρετε το υπερκείμενο σε άλλο αποστειρωμένο σωλήνα φυγοκέντρησης και αποθηκεύστε στους -20℃ για 2 εβδομάδες.

2.Ενίσχυση PCR

Αφαιρέστε το 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix από -20℃ και ξεπαγώστε σε πάγο, ανακατέψτε ανάποδα και προετοιμάστε το σύστημα αντίδρασης PCR σύμφωνα με τον ακόλουθο πίνακα (λειτουργία σε πάγο):

Σημείωση:

α) Η ποσότητα που προστίθεται δεν πρέπει να υπερβαίνει το 1/10 του συστήματος και εάν προστεθεί πάρα πολύ, η ενίσχυση PCR μπορεί να ανασταλεί.

Συνιστώμενες συνθήκες PCR

Σημείωση:

α) Θερμοκρασία ανόπτησης: Αναφορικά με την τιμή Tm του ασταριού, συνιστάται να ρυθμίσετε τη θερμοκρασία ανόπτησης στη μικρότερη τιμή Tm του ασταριού +3~5℃.

Κοινά προβλήματα και λύσεις

1.Χωρίς στοχευμένες ταινίες

1) Υπερβολικό προϊόν λύσης.Επιλέξτε την καταλληλότερη ποσότητα προτύπου, συνήθως όχι περισσότερο από το 1/10 του συστήματος.

2) Πολύ μεγάλο μέγεθος δείγματος.Αραιώστε το προϊόν λύσης 10 φορές και στη συνέχεια ενισχύστε ή μειώστε το μέγεθος του δείγματος και επαναλύστε.

3) Τα δείγματα ιστών δεν είναι φρέσκα.Συνιστάται η χρήση φρέσκων δειγμάτων ιστού.

4) Κακή ποιότητα ασταριού.Χρησιμοποιήστε γονιδιωματικό DNA για ενίσχυση για να επαληθεύσετε την ποιότητα του εκκινητή και να βελτιστοποιήσετε τον σχεδιασμό του εκκινητή.

2.Μη ειδική ενίσχυση

1) Η θερμοκρασία ανόπτησης είναι πολύ χαμηλή και ο αριθμός κύκλου είναι πολύ υψηλός.Αυξήστε τη θερμοκρασία ανόπτησης και μειώστε τον αριθμό των κύκλων.

2) Η συγκέντρωση του προτύπου είναι πολύ υψηλή.Μειώστε την ποσότητα του προτύπου ή αραιώστε το πρότυπο 10 φορές μετά την ενίσχυση.

3) Κακή ειδικότητα εκκινητή.Βελτιστοποιήστε το σχέδιο του ασταριού.

Σημειώσεις

1.Για να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση μεταξύ των δειγμάτων, θα πρέπει να προετοιμαστούν πολλαπλά εργαλεία δειγματοληψίας και η επιφάνεια των εργαλείων μπορεί να καθαριστεί με διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 2% ή καθαριστικό νουκλεϊκού οξέος μετά από κάθε δειγματοληψία, εάν απαιτείται επαναλαμβανόμενη χρήση.

2.Συνιστάται η χρήση φρέσκων χαρτομάντιλων ποντικιού και ο όγκος δειγματοληψίας δεν πρέπει να είναι πολύ μεγάλος για να μην επηρεαστούν τα αποτελέσματα της ενίσχυσης.

3.Το ρυθμιστικό διάλυμα Lysis θα πρέπει να αποφεύγει τη συχνή κατάψυξη-απόψυξη και μπορεί να αποθηκευτεί στους 2~8℃ για βραχυπρόθεσμη πολλαπλή χρήση.Εάν φυλάσσεται σε χαμηλή θερμοκρασία, μπορεί να σημειωθεί καθίζηση και πρέπει να διαλυθεί πλήρως πριν από τη χρήση.

4.Το PCR Mix θα πρέπει να αποφεύγει τη συχνή κατάψυξη-απόψυξη και μπορεί να αποθηκευτεί στους 4℃ για βραχυπρόθεσμη επαναλαμβανόμενη χρήση.

5.Αυτό το προϊόν προορίζεται μόνο για επιστημονική πειραματική έρευνα και δεν πρέπει να χρησιμοποιείται στην κλινική διάγνωση ή θεραπεία.