Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Μπλε)

Αριθμός γάτας: HCB5041B

Το Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) είναι ένα προδιάλυμα για ποσοτική ενίσχυση PCR 2× σε πραγματικό χρόνο που χαρακτηρίζεται από υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα, έχει μπλε χρώμα και έχει ως αποτέλεσμα την ανίχνευση προσθήκης δείγματος.Το βασικό συστατικό Taq DNA πολυμεράση χρησιμοποιεί αντίσωμα εν θερμώ για την αποτελεσματική αναστολή της μη ειδικής ενίσχυσης λόγω της ανόπτησης του εκκινητή κατά την προετοιμασία του δείγματος.Ταυτόχρονα, ο τύπος προσθέτει τους παράγοντες προώθησης για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας ενίσχυσης της αντίδρασης PCR και την εξισορρόπηση της ενίσχυσης γονιδίων με διαφορετική περιεκτικότητα GC (30 ~ 70%), έτσι ώστε η ποσοτική PCR να μπορεί να αποκτήσει μια καλή γραμμική σχέση σε ευρεία ποσοτική περιοχή.Αυτό το προϊόν περιέχει ειδική βαφή παθητικής αναφοράς ROX, η οποία είναι εφαρμόσιμη στα περισσότερα όργανα qPCR.Δεν είναι απαραίτητο να ρυθμίσετε τη συγκέντρωση του ROX σε διαφορετικά όργανα.Είναι απαραίτητο μόνο να προστεθούν εκκινητές και μήτρες για την προετοιμασία του συστήματος αντίδρασης για ενίσχυση.

Συστατικά

Universal Blue qPCR Master Mix

Συνθήκες αποθήκευσης

Το προϊόν αποστέλλεται με παγοκύστες και μπορεί να αποθηκευτεί στους -25℃~-15℃ για 18 μήνες.Είναι απαραίτητο να αποφεύγεται η ισχυρή ακτινοβολία φωτός κατά την αποθήκευση ή την προετοιμασία του συστήματος αντίδρασης.

Προσδιορισμός

Οδηγίες

1.Σύστημα Αντίδρασης

[Σημείωση]: Ανακατέψτε καλά πριν τη χρήση για να αποφύγετε τις υπερβολικές φυσαλίδες από το δυνατό τίναγμα.

α) Συγκέντρωση εκκινητή: Η τελική συγκέντρωση εκκινητή είναι 0,2 μmol/L και μπορεί επίσης να ρυθμιστεί μεταξύ 0,1 και 1,0 μmol/L ανάλογα με την περίπτωση.

β) Συγκέντρωση προτύπου: Εάν το εκμαγείο είναι μη αραιωμένο μητρικό διάλυμα cDNA, ο όγκος που χρησιμοποιείται δεν πρέπει να υπερβαίνει το 1/10 του συνολικού όγκου της αντίδρασης qPCR.

γ) Αραίωση προτύπου: Συνιστάται η αραίωση του μητρικού διαλύματος cDNA κατά 5-10 φορές.Η βέλτιστη ποσότητα προτύπου που προστίθεται είναι καλύτερη όταν η τιμή Ct που λαμβάνεται με ενίσχυση είναι 20-30 κύκλοι.

δ) Σύστημα αντίδρασης: Συνιστάται η χρήση 20μL ή 50μL για να διασφαλιστεί η αποτελεσματικότητα και η επαναληψιμότητα της ενίσχυσης του γονιδίου στόχου.

ε) Προετοιμασία συστήματος: Παρακαλούμε προετοιμαστείτε στον εξαιρετικά καθαρό πάγκο και χρησιμοποιήστε τις μύτες και τους σωλήνες αντίδρασης χωρίς υπολείμματα νουκλεάσης.Συνιστάται η χρήση των άκρων με φυσίγγια φίλτρου.Αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση και τη μόλυνση από αεροζόλ.

2.Πρόγραμμα αντίδρασης

Τυπικό πρόγραμμα

Γρήγορο πρόγραμμα

[Σημείωση]: Το γρήγορο πρόγραμμα είναι κατάλληλο για τη συντριπτική πλειοψηφία των γονιδίων και τα τυπικά προγράμματα μπορούν να δοκιμαστούν για μεμονωμένα σύνθετα γονίδια δευτερογενούς δομής.

α) Θερμοκρασία και χρόνος ανόπτησης: Προσαρμόστε ανάλογα με το μήκος του εκκινητή και του γονιδίου στόχου.

β) Λήψη σήματος φθορισμού (★): Ρυθμίστε την πειραματική διαδικασία σύμφωνα με τις απαιτήσεις στις οδηγίες χρήσης του οργάνου.

γ) Καμπύλη τήξης: Το προεπιλεγμένο πρόγραμμα οργάνου μπορεί να χρησιμοποιηθεί κανονικά.

3. Ανάλυση Αποτελεσμάτων 

Απαιτήθηκαν τουλάχιστον τρία βιολογικά αντίγραφα για ποσοτικά πειράματα.Μετά την αντίδραση, η καμπύλη ενίσχυσης και η καμπύλη τήξης πρέπει να επιβεβαιωθούν.

3.1 Καμπύλη ενίσχυσης:

Η τυπική καμπύλη ενίσχυσης έχει σχήμα S.Η ποσοτική ανάλυση είναι πιο ακριβής όταν η τιμή Ct πέφτει μεταξύ 20 και 30. Εάν η τιμή Ct είναι μικρότερη από 10, είναι απαραίτητο να αραιώσετε το πρότυπο και να πραγματοποιήσετε ξανά τη δοκιμή.Όταν η τιμή Ct είναι μεταξύ 30-35, είναι απαραίτητο να αυξηθεί η συγκέντρωση του εκμαγείου ή ο όγκος του συστήματος αντίδρασης, έτσι ώστε να βελτιωθεί η απόδοση ενίσχυσης και να διασφαλιστεί η ακρίβεια της ανάλυσης του αποτελέσματος.Όταν η τιμή Ct είναι μεγαλύτερη από 35, τα αποτελέσματα της δοκιμής δεν μπορούν να αναλύσουν ποσοτικά την έκφραση του γονιδίου, αλλά μπορούν να χρησιμοποιηθούν για ποιοτική ανάλυση.

3.2 Καμπύλη τήξης:

Η μοναδική κορυφή της καμπύλης τήξης δείχνει ότι η ειδικότητα της αντίδρασης είναι καλή και ότι μπορεί να πραγματοποιηθεί ποσοτική ανάλυση.Εάν η καμπύλη τήξης εμφανίζει διπλές ή πολλαπλές κορυφές, δεν μπορεί να πραγματοποιηθεί ποσοτική ανάλυση.Η καμπύλη τήξης δείχνει διπλές κορυφές και είναι απαραίτητο να κριθεί εάν η αιχμή που δεν είναι στόχος είναι διμερές εκκινητή ή μη ειδική ενίσχυση με ηλεκτροφόρηση γέλης DNA αγαρόζης.Εάν πρόκειται για διμερές εκκινητή, συνιστάται η μείωση της συγκέντρωσης του εκκινητή ή επανασχεδιασμός εκκινητών με υψηλή απόδοση ενίσχυσης.Εάν πρόκειται για μη ειδική ενίσχυση, αυξήστε τη θερμοκρασία ανόπτησης ή επανασχεδιάστε τους εκκινητές με ειδικότητα.

Σημειώσεις

Φοράτε τα απαραίτητα ΜΑΠ, όπως παλτό εργαστηρίου και γάντια, για να διασφαλίσετε την υγεία και την ασφάλειά σας!

Αυτό το προϊόν προορίζεται για ερευνητική χρήση ΜΟΝΟ!