Ρνάση Α
Η ριβονουκλεάση Α (RNaseA) είναι ένα μονόκλωνο πολυπεπτίδιο που περιέχει 4 δισουλφιδικούς δεσμούς με μοριακό βάρος περίπου 13,7 kDa.Η RNase A είναι μια ενδοριβονουκλεάση που αποικοδομεί ειδικά το μονόκλωνο RNA στα υπολείμματα C και U.Συγκεκριμένα, η διάσπαση αναγνωρίζει τον φωσφοδιεστερικό δεσμό που σχηματίζεται από την 5'-ριβόζη ενός νουκλεοτιδίου και τη φωσφορική ομάδα στην 3'-ριβόζη του παρακείμενου νουκλεοτιδίου πυριμιδίνης, έτσι ώστε τα 2, 3'-κυκλικά φωσφορικά να υδρολύονται στην αντίστοιχη3 «φωσφορικά νουκλεοσίδια (π.χ. το pG-pG-pC-pA-pG διασπάται από την RNase A για να δημιουργηθούν pG-pG-pCp και A-PG).Η RNase A είναι η πιο δραστική στη διάσπαση μονόκλωνου RNA.Η συνιστώμενη συγκέντρωση εργασίας είναι 1-100μG/mL, συμβατή με διάφορα συστήματα αντίδρασης.Η χαμηλή συγκέντρωση άλατος (0-100 mM NaCl) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την κοπή αλυσίδων μονόκλωνου RNA, δίκλωνου RNA και RNA που σχηματίζονται από υβριδισμό RNA-DNA.Ωστόσο, σε υψηλή συγκέντρωση άλατος (≥0,3 M), η RNase A διασπά μόνο ειδικά το μονόκλωνο RNA.
Η RNase A χρησιμοποιείται πιο συχνά για την απομάκρυνση του RNA κατά την παρασκευή του πλασμιδικού DNA ή του γονιδιωματικού DNA. Το εάν η DNase είναι ενεργή ή όχι κατά τη διαδικασία παρασκευής μπορεί εύκολα να επηρεάσει την αντίδραση.Η παραδοσιακή μέθοδος βρασμού σε υδατόλουτρο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την απενεργοποίηση της δραστηριότητας της DNase.Αυτό το προϊόν δεν περιέχει DNase και πρωτεάση και δεν χρειάζεται θερμική επεξεργασία πριν από τη χρήση.Επιπλέον, αυτό το προϊόν μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί σε πειράματα μοριακής βιολογίας, όπως ανάλυση προστασίας RNase και ανάλυση αλληλουχίας RNA.
Συνθήκες αποθήκευσης
Το προϊόν μπορεί να αποθηκευτεί στους -25-15℃, με ισχύ για 2 χρόνια.
Οδηγίες
Αυτή είναι μια από τις κοινές μεθόδους για την παρασκευή διαλύματος αποθήκευσης RNase A.Μπορεί επίσης να παρασκευαστεί απόάλλες μεθόδους σύμφωνα με τις παραδοσιακές μεθόδους της εργαστηριακής βιβλιογραφίας ή της βιβλιογραφίας αναφοράς (όπωςάμεσα διαλύεται σε διάλυμα Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 ή Tris-NaCl)
1. Χρησιμοποιήστε 10 mM οξικό νάτριο (pH 5,2) για να παρασκευάσετε 10 mg/mL διαλύματος αποθήκευσης RNase A
2. Θέρμανση στους 100 ℃ για 15 λεπτά
3. Ψύξτε σε θερμοκρασία δωματίου, προσθέστε 1/10 όγκου 1 M Tris-HCl (pH 7,4), ρυθμίστε το pH στο 7,4 (γιαΓια παράδειγμα, προσθέστε 500 ml διαλύματος αποθήκευσης RNase 10 g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Υποσυσκευασία στους -20℃ για παγωμένη αποθήκευση, η οποία μπορεί να είναι σταθερή για έως και 2 χρόνια.
[Σημειώσεις]: Κατά το βρασμό του διαλύματος RNaseA υπό ουδέτερες συνθήκες, θα σχηματιστεί καθίζηση RNase.Το βράζουμε σε χαμηλότερο pH, και αν υπάρχει κατακρήμνιση, μπορεί να παρατηρηθεί, που μπορεί να προκληθεί από την παρουσία πρωτεϊνικών ακαθαρσιών.Εάν εντοπιστεί ίζημα μετά το βρασμό, οι ακαθαρσίες μπορούν να αφαιρεθούν με φυγοκέντρηση υψηλής ταχύτητας (13000 rpm) και στη συνέχεια να υποσυσκευαστούν για αποθήκευση κατάψυξης.
Πληροφορίες Προϊόντος
| Συνώνυμα | Ριβονουκλεάση Ι;Παγκρεατική ριβονουκλεάση;Ριβονουκλεάση 3'-πυριμιδνοολιγονουκλεοτιδοϋδρολάση;Ρνάση Α;Ενδοριβονουλκάση Ι |
| CAS Αρ. | 9001-99-4 |
| Εμφάνιση | Λευκή λυοφιλοποιημένη σκόνη |
| Μοριακό βάρος | ~ 13,7 kDa (αλληλουχία αμινοξέων) |
| Τιμή Ph | 7,6 (εύρος δραστηριότητας 6-10) |
| Κατάλληλη θερμοκρασία | 60℃ (Εύρος δραστηριότητας 15-70℃) |
| Ενεργοποιητικός παράγοντας | Na2+.κ+ |
| Ανασταλτικός παράγοντας | Αναστολέας Rnase |
| Μέθοδος αδρανοποίησης | Δεν μπορεί να απενεργοποιηθεί με θέρμανση, προτείνεται η χρήση στήλης φυγοκέντρησης |
| Προέλευση | Βοδινός |
| Διαλυτότητα | Διαλυτό στο νερό (10mg/ml) |
| Απώλεια σε στεγνό | ≤5,0% |
| Ενζυμική δραστηριότητα | ≥60 μονάδες Kunitz/mg |
| Ισοηλεκτρικό σημείο | 9.6 |
Σημειώσεις
Για την ασφάλεια και την υγεία σας, παρακαλούμε να φοράτε παλτό εργαστηρίου και γάντια μιας χρήσης για τη λειτουργία.
