Wild Taq DNA Polymerase
Η Taq DNA Polymerase είναι μια θερμοσταθερή DNA πολυμεράση από το Thermus aquaticus YT-1, η οποία έχει δραστηριότητα πολυμεράσης 5'→3' και δράση ενδονουκλεάσης κρημνού 5'.
Συστατικά
| Συστατικό | HC1010Α-01 | HC1010Α-02 | HC1010Α-03 | HC1010Α-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 mL | 2×10 mL | 2×50 mL | 5×200 mL |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,1 mL | 1 mL | 5 mL | 5×10 mL |
Κατάσταση Αποθήκευσης
Μεταφορά κάτω από 0°C και αποθήκευση στους -25°C~-15°C.
Ορισμός μονάδας
Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα του ενζύμου που ενσωματώνει 15 nmol dNTP σε αδιάλυτο σε οξύ υλικό σε 30 λεπτά στους 75°C.
Ελεγχος ποιότητας
1.Προσδιορισμός καθαρότητας πρωτεΐνης (SDS-PAGE):Η καθαρότητα της Taq DNA πολυμεράσης προσδιορίστηκε ≥95% με ανάλυση SDS-PAGE.
2.EndΔραστηριότητα onuclease:Τουλάχιστον 5 U πολυμεράσης Taq DNA με 1 μg λDNA για 16 ώρες στους 37 ℃ δεν οδηγεί σε ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
3.Δραστηριότητα εξωνουκλεάσης:Τουλάχιστον 5 U Taq DNA πολυμεράσης με 1 μg λ-Hind Ⅲ DNA πέψης για 16 ώρες στους 37 ℃ δεν οδηγεί σε ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
4.Δραστηριότητα Nickase:Τουλάχιστον 5 U πολυμεράσης Taq DNA με 1 μg pBR322 DNA για 16 ώρες στους 37°C δεν οδηγεί σε ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
5.Δραστηριότητα RNase:Τουλάχιστον 5 U πολυμεράσης Taq DNA με 1,6 μg MS2 RNA για 16 ώρες στους 37°C δεν οδηγεί σε ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
6.Ε. coliDNA:5 U Taq DNA πολυμεράσης ελέγχονται για την παρουσία γονιδιωματικού DNA του Ε. coli χρησιμοποιώντας TaqMan qPCR με εκκινητές ειδικούς για τον τόπο του Ε. coli 16S rRNA.Η μόλυνση του γονιδιωματικού DNA του E. coli είναι ≤1 αντίγραφο.
7.Ενίσχυση PCR (5,0 kb λάμδα DNA)- Μια αντίδραση 50 μL που περιέχει 5 ng λάμδα DNA με 5 μονάδες Taq DNA Πολυμεράσης για 25 κύκλους ενίσχυσης PCR έχει ως αποτέλεσμα το αναμενόμενο προϊόν 5,0 kb.
Ρύθμιση αντίδρασης
| Συστατικά | Ενταση ΗΧΟΥ |
| Πρότυπο DNAa | προαιρετικός |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| Μίγμα dNTP (10mM το καθένα) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseσι | 0,25 μL |
| Νερό χωρίς νουκλεάση | Έως 50 μL |
Σημειώσεις:
1) Η βέλτιστη συγκέντρωση αντίδρασης διαφορετικών προτύπων είναι διαφορετική.Ο παρακάτω πίνακας δείχνει τη συνιστώμενη χρήση προτύπου του συστήματος αντίδρασης 50 µL.
| DNA | Ποσό |
| Γονιδιωματικό | 1 ng-1 μg |
| Πλασμίδιο ή Ιικό | 1 pg-1 ng |
2) Η βέλτιστη συγκέντρωση της Taq DNA Polymerase μπορεί να κυμαίνεται από 0,25 µL~1 µL σε εξειδικευμένες εφαρμογές.
ΑντίδρασηΠρόγραμμα
| Βήμα | Θερμοκρασία(°C) | χρόνος | Κύκλοι |
| Αρχική μετουσίωσηa | 95 ℃ | 5 λεπτά | - |
| Μετουσίωσης | 95 ℃ | 15-30 δευτ | 30-35 Κύκλοι |
| Ανόπτησησι | 60 ℃ | 15 δευτ | |
| Επέκταση | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Τελική επέκταση | 72 ℃ | 5 λεπτά | - |
Σημειώσεις:
1) Η αρχική συνθήκη μετουσίωσης είναι κατάλληλη για τις περισσότερες αντιδράσεις ενίσχυσης και μπορεί να τροποποιηθεί ανάλογα με την πολυπλοκότητα της δομής του προτύπου.Εάν η δομή του προτύπου είναι πολύπλοκη, ο χρόνος προ-μετουσίωσης μπορεί να επεκταθεί σε 5 – 10 λεπτά για να βελτιωθεί το αρχικό αποτέλεσμα μετουσίωσης.
2) Η θερμοκρασία ανόπτησης πρέπει να ρυθμιστεί σύμφωνα με την τιμή Tm του ασταριού, η οποία είναι γενικά ρυθμισμένη σε 3~5 ℃ χαμηλότερη από την τιμή Tm του ασταριού.Για πολύπλοκα πρότυπα, είναι απαραίτητο να ρυθμίσετε τη θερμοκρασία ανόπτησης και να παρατείνετε τον χρόνο επέκτασης για να επιτύχετε αποτελεσματική ενίσχυση.
