Superstart qPCR Premix plus-UNG

Αριθμός γάτας: HCB5071E

Πακέτο: 100RXN/1000RXN/10000RXN

Λυοφιλοποιήσιμο

Τροποποίηση αντισωμάτων, 95℃, 1-5 λεπτά ζεστή εκκίνηση

Υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα

Σταθερή ανίχνευση σε χαμηλή συγκέντρωση, υψηλή τιμή φθορισμού

Αποστολή Ερώτησης

περιγραφή προϊόντος

Λεπτομέρεια προϊόντος

Αριθμός γάτας: HCB5071E

Το Superstart qPCR Premix plus-UNG είναι ένα εξειδικευμένο αντιδραστήριο σχεδιασμένο για ποιοτικές και ποσοτικές αντιδράσεις Real Time PCR με χρήση ανίχνευσης με βάση ανιχνευτή, που αναπτύχθηκε ειδικά για διαδικασίες λυοφιλοποίησης.Περιέχει ένα νέο ένζυμο θερμής εκκίνησης Hotstart Taq plus (DG), το οποίο έχει τη δράση του ενζύμου Taq σφραγισμένη σε θερμοκρασία δωματίου, αναστέλλοντας αποτελεσματικά τη μη ειδική ενίσχυση που προκαλείται από μη ειδική ανόπτηση εκκινητών ή σχηματισμό διμερούς εκκινητή σε συνθήκες χαμηλής θερμοκρασίας, βελτιώνοντας έτσι την ειδικότητα της αντίδρασης ενίσχυσης.Αυτό το αντιδραστήριο χρησιμοποιεί ένα βελτιστοποιημένο ειδικό ρυθμιστικό διάλυμα qPCR και σύστημα αντιμόλυνσης UNG/dUTP για την επίτευξη ταχείας εν θερμώ εκκίνησης, βελτιώνοντας σημαντικά την αποτελεσματικότητα και την ευαισθησία των αντιδράσεων qPCR.Μπορεί να αποκτήσει καλές τυπικές καμπύλες σε ένα ευρύ φάσμα περιοχών ποσοτικοποίησης και να εκτελέσει με ακρίβεια τον ποσοτικό προσδιορισμό, αποτρέποντας αποτελεσματικά την ψευδώς θετική ενίσχυση που προκαλείται από υπολειμματικά προϊόντα PCR ή μόλυνση από αεροζόλ.Αυτό το αντιδραστήριο είναι συμβατό με τα περισσότερα όργανα φθορισμού ποσοτικής PCR κατασκευαστών όπως Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad και Roche κ.λπ., και παρουσιάζει καλή σταθερότητα σε λυοφιλοποιημένη μορφή.

Προηγούμενος: BsaI HCP1014A

Επόμενο: Πρωτεϊνάση Κ (υγρή) HC4502A

Σύνθεση αντιδραστηρίου

1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg²⁺δωρεάν) (ΓΔ)

2. 250 mM MgCl₂

3. 4×λυοπροστατευτικό (προαιρετικό)

Συνθήκες αποθήκευσης

Μακροχρόνια αποθήκευση στους -20℃.μπορεί να αποθηκευτεί στους 4℃ για έως και 3 μήνες.Ανακατέψτε καλά πριν τη χρήση καιαποφύγετε την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη.

Πρωτόκολλο Ποδηλασίας

Διαδικασία	Θερμ.	χρόνος	Κύκλος
Πέψη	50℃	2 λεπτά	1
Ενεργοποίηση πολυμεράσης	95℃	1~5 λεπτά	1
Αλλοιώνω την φύση	95℃	10~20 δευτ	40-50
Ανόπτηση και επέκταση	56~64℃	20~60 δευτ	40-50

qPCR Liquid Reaction SyΠροετοιμασία στελέχους

Σύνθεση	Όγκος 25µL	Όγκος 50µL	Τελική Συγκέντρωση
5×HotstartPremix plus-UNG(Mg²⁺δωρεάν) (ΓΔ)	5 μL	10µL	1×
250 mM MgCl₂	0,45 μL	0,9 µL	4,5 mM
4×λυοπροστατευτικό¹	6,25 µL	12,5 µL	1×
25×Μίγμα Primer-Probe²	1µL	2 μL	1×
Πρότυπο DNA³	——	——	——
ddH₂O	Σε 25 µL	Σε 50 µL	——

1. Μια τελική συγκέντρωση 0,2μM για εκκινητές συνήθως αποδίδει καλά αποτελέσματα.όταν η απόδοση της αντίδρασης είναι χαμηλή, προσαρμόστε τη συγκέντρωση του εκκινητή εντός του εύρους 0,2-1μM όπως απαιτείται.Η συγκέντρωση του ανιχνευτή τυπικά βελτιστοποιείται εντός του εύρους 0,1-0,3 μM μέσω πειραμάτων βαθμίδωσης για την εύρεση βέλτιστων συνδυασμών.

2. Ο αριθμός αντιγράφων των γονιδίων-στόχων που περιέχονται σε διαφορετικούς τύπους προτύπων ποικίλλει.Εάν είναι απαραίτητο, μπορεί να πραγματοποιηθεί αραίωση βαθμίδωσης για να προσδιοριστεί η βέλτιστη ποσότητα προσθήκης προτύπου.

3. Αυτό το σύστημα μπορεί να λυοφιλοποιηθεί.όταν οι πελάτες χρησιμοποιούν αυτό το σύστημα χωρίς απαιτήσεις λυοπροστατευτικού, μπορεί να προστεθεί επιλεκτικά 4×λυοπροστατευτικό· εάν απαιτούνται λυοπροστατευτικά προϊόντα, κατά τη διάρκεια της επικύρωσης απόδοσης προϊόντος σταδίου υγρών αντιδραστηρίων, πρέπει να προσθέσει 4×λυοπροστατευτικό για να διασφαλιστεί η συνέπεια με τα λυοφιλοποιημένα συστατικά του συστήματος και επιπτώσεις.

Όταν χρησιμοποιείται το σύστημαδ για λυοφιλίωση, ετοιμάστε το Σύστημα as ΕΠΟΜΕΝΟ:

Σύνθεση	25µL Σύστημα Αντίδρασης
5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg²⁺δωρεάν) (ΓΔ)	5 μL
250 mM MgCl₂	0,45 μL
4×λυοπροστατευτικό	6,25 µL
25×Μίγμα Primer-Probe	1µL
ddH₂O	Σε 18~20 μL

* Εάν χρειάζονται άλλα συστήματα λυοφιλοποίησης, συμβουλευτείτε το ξεχωριστά.

Διαδικασία Λυοφιλοποίησηςss

Διαδικασία	Θερμ.	χρόνος	Κατάσταση	Πίεση
Προκατάψυξη	4℃	30 λεπτά	Κρατήστε	1 atm
	-50℃	60 λεπτά	Ψύξη
	-50℃	180 λεπτά	Κρατήστε
Πρωτογενής ξήρανση	-30℃	60 λεπτά	Θέρμανση	Ultimate Vacuum
Πρωτογενής ξήρανση	-30℃	70 λεπτά	Κρατήστε	Ultimate Vacuum
Δευτερεύουσα ξήρανση	25℃	60 λεπτά	Θέρμανση	Ultimate Vacuum
Δευτερεύουσα ξήρανση	25℃	300 λεπτά	Κρατήστε	Ultimate Vacuum

1. Αυτή η διαδικασία λυοφιλοποίησης είναι μια διαδικασία λυοφιλοποίησης επί τόπου για ένα σύστημα αντίδρασης 25 μL.ανΑπαιτούνται σφαιρίδια λυοφιλοποίησης ή άλλες διαδικασίες λυοφιλίωσης επί τόπου, ζητήστε ξεχωριστά.

2. Η παραπάνω διαδικασία λυοφιλοποίησης είναι μόνο για αναφορά.Διαφορετικοί τύποι προϊόντων και διαφορετικά λυοστεγνωτήρια έχουν διαφορετικές παραμέτρους, επομένως οι προσαρμογές μπορούν να γίνουν σύμφωνα με την πραγματικήσυνθήκες κατά τη χρήση.

3. Διαφορετικές διαδικασίες λυοφιλοποίησης μπορεί να είναι κατάλληλες για διαφορετικά μεγέθη παρτίδων λυοφιλοποιημένωνπροϊόντα, επομένως πρέπει να πραγματοποιείται επαρκής επικύρωση δοκιμών όταν χρησιμοποιείται για παραγωγή μεγάλης κλίμακας.

Οδηγίες για τη χρήση του lyophilizeδ σκόνη

1. Φυγοκεντρήστε σύντομα τη λυοφιλοποιημένη σκόνη.

2. Προσθέστε εκμαγείο νουκλεϊκού οξέος στη λυοφιλοποιημένη σκόνη και προσθέστε νερό μέχρι 25 μL.

3. Ανακατέψτε καλά με φυγοκέντρηση και περάστε το στη μηχανή.

Ελεγχος ποιότητας:

1. Λειτουργικός έλεγχος: ευαισθησία, ειδικότητα, αναπαραγωγιμότητα του qPCR.

2. Καμία εξωγενής δραστηριότητα νουκλεάσης, καμία εξωγενής ενδο/εξωνουκλεάση μόλυνση.

Τεχνικές πληροφορίες:

1. Το Superstart qPCR Premix plus-UNG χρησιμοποιεί ένα νέο ένζυμο θερμής εκκίνησης που επιτρέπει την ταχεία εν θερμώ εκκίνηση εντός 1~5 λεπτών.μέσω ειδικής σύνθεσης ρυθμιστικού διαλύματος είναι κατάλληλο για πολυπλέξεις φθορίζουσες ποσοτικές αντιδράσεις PCR.

2. Έχει υψηλότερη ειδικότητα που βελτιώνει σημαντικά την ευαισθησία της ποσοτικής ανίχνευσης ορίου PCR φθορισμού, κάνοντας την κανονικοποίηση των καμπυλών ενίσχυσης, η τιμή φθορισμού επιτυγχάνει εμφανή βελτίωση σε πρότυπα χαμηλής συγκέντρωσης, κατάλληλα ως αντιδραστήρια ποσοτικής ανίχνευσης PCR φθορισμού υψηλής ευαισθησίας.

3. Για εκκινητές με χαμηλότερη θερμοκρασία ανόπτησης ή μεγαλύτερα από 200 bp θραύσματα, συνιστάται η μέθοδος 3 σταδίων.

4. Η αποτελεσματικότητα χρήσης του dUTP και η ευαισθησία στο ένζυμο UNG διαφέρουν για διαφορετικά γονίδια στόχους, επομένως εάν η χρήση του συστήματος UNG οδηγεί σε μείωση της ευαισθησίας ανίχνευσης, το σύστημα αντίδρασης θα πρέπει να προσαρμοστεί και να βελτιστοποιηθεί.Εάν απαιτείται τεχνική υποστήριξη, επικοινωνήστε με την εταιρεία μας.

5. Χρησιμοποιήστε ειδικές περιοχές και πιπέτες πριν και μετά την ενίσχυση, φορέστε γάντια κατά τη λειτουργία και αντικαταστήστε τα συχνά.Μην ανοίγετε το σωληνάριο αντίδρασης μετά την ολοκλήρωση της PCR για να ελαχιστοποιήσετε τη μόλυνση των δειγμάτων από προϊόντα PCR.