5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

Αριθμός γάτας: HCB5142A

Το Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) είναι ένα εξαιρετικά σταθερό μείγμα με βάση ανιχνευτή ενός σωλήνα κατάλληλο για αντίστροφη μεταγραφή ενός σταδίου και ποσοτική PCR (qRT-PCR).Υποστηρίζει την προ-ανάμειξη ασταριών και ανιχνευτών και παραμένει σταθερό μετά από μακροχρόνια αποθήκευση σε χαμηλή θερμοκρασία.Το προς δοκιμή δείγμα μπορεί να προστεθεί απευθείας κατά τη χρήση, χωρίς πρόσθετη λειτουργία ανοίγματος σωλήνων/πιπέτας.Αυτό το προϊόν παρέχει συστατικά, π.χ. DNA πολυμεράση θερμής εκκίνησης, M-MLV, ασταθή στη θερμότητα γλυκοζυλάση DNA ουρακίλης (TS-UNG), αναστολέας RNase, MgCl₂, dNTP (με dUTP αντί για dTTP) και σταθεροποιητές.Με τη γενετικά τροποποιημένη ταχεία ενίσχυση ανάστροφη μεταγραφάση και DNA πολυμεράση, είναι δυνατό να ολοκληρωθεί η ενίσχυση PCR μέσα σε 20-40 λεπτά.Αυτό το αντιδραστήριο χρησιμοποιεί ειδικό ρυθμιστικό διάλυμα για qPCR με μικτά ένζυμα του αντι-ανασταλτικού ενζύμου ενίσχυσης και του ενζύμου UNG.Ως εκ τούτου, μπορεί να επιτύχει καλή ενίσχυση των γονιδίων-στόχων και να αποτρέψει την ψευδή ενίσχυση που προκαλείται από υπολειμματική PCR και ρύπανση από αεροζόλ.Αυτό το αντιδραστήριο είναι συμβατό με τα περισσότερα όργανα ποσοτικής PCR φθορισμού από κατασκευαστές όπως οι Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad και Roche.

Συστατικό

1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix

2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)

Συνθήκες αποθήκευσης

Όλα τα εξαρτήματα θα πρέπει να διατηρούνται στους -20℃ για μακροχρόνια αποθήκευση και στους 4℃ για έως και 3 μήνες.Ανακατέψτε καλά μετά την απόψυξη και φυγοκεντρήστε πριν τη χρήση.Αποφύγετε τη συχνή κατάψυξη-απόψυξη.

Προετοιμασία συστήματος αντίδρασης qRT-PCR

1) α. Η τελική συγκέντρωση του αστάρι είναι συνήθως 0,2μM.Για καλύτερα αποτελέσματα, η συγκέντρωση του αστάρι μπορεί να βελτιστοποιηθεί εντός του εύρους 0,2-1μM.Γενικά, η συγκέντρωση του ανιχνευτή μπορεί να βελτιστοποιηθεί εντός της περιοχής 0,1-0,3 μΜ.

2) β. Όταν χρησιμοποιείτε μια γρήγορη διαδικασία PCR, η αύξηση της συγκέντρωσης των εκκινητών και των ανιχνευτών μπορεί να οδηγήσει σε καλύτερα αποτελέσματα ενίσχυσης και η αναλογία τους θα πρέπει να βελτιστοποιηθεί ανάλογα.

3) Διαφορετικοί τύποι δειγμάτων περιέχουν διαφορετικούς τύπους και περιεχόμενο αναστολέα και αριθμό αντιγράφων του γονιδίου στόχου.Ο όγκος του δείγματος πρέπει να λαμβάνεται υπόψη από την πραγματική συνθήκη.Κάντε μια αραίωση του δείγματος με νερό χωρίς νουκλεάση ή ρυθμιστικό διάλυμα ΤΕ, εάν είναι απαραίτητο.

Αντίδραση Γτις προϋποθέσεις

Ελεγχος ποιότητας

1.Ανίχνευση λειτουργιών: ευαισθησία, ειδικότητα και επαναληψιμότητα του qPCR.

2.Καμία εξωγενής δραστηριότητα νουκλεάσης: καμία εξωγενής ενδονουκλεάση και ρύπανση από εξωνουκλεάσες.

Σημειώσεις

1.Ο ρυθμός ενίσχυσης της ταχείας πολυμεράσης DNA δεν είναι μικρότερος από 1kb/10s.Διαφορετικά όργανα PCR έχουν διαφορετικές ταχύτητες θέρμανσης και ψύξης, τρόπους ελέγχου θερμοκρασίας και θερμική αγωγιμότητα, και επομένως η βελτιστοποίηση της συγκέντρωσης εκκινητή/ανιχνευτή και η μέθοδος λειτουργίας σε συνδυασμό με το συγκεκριμένο όργανο γρήγορης PCR είναι απαραίτητη.

2.Αυτό το προϊόν έχει ευρεία εφαρμογή και είναι κατάλληλο για μοριακή διάγνωση υψηλής ευαισθησίας.Η μέθοδος PCR τριών σταδίων συνιστάται για εκκινητές με χαμηλή θερμοκρασία ανόπτησης ή για ενίσχυση μακρών θραυσμάτων άνω των 200 bp.

3.Δεδομένου ότι διαφορετικά αμπλικόνια έχουν διαφορετική απόδοση χρήσης του dUTP και διαφορετική ευαισθησία στο UNG, τα αντιδραστήρια θα πρέπει να βελτιστοποιηθούν εάν η ευαισθησία ανίχνευσης μειωθεί όταν χρησιμοποιείται σύστημα UNG.Επικοινωνήστε μαζί μας για τεχνική υποστήριξη εάν χρειάζεται.

4.Για να αποφευχθεί η ενίσχυση των προϊόντων PCR μεταφοράς, απαιτείται ειδική πειραματική περιοχή και πιπέτα για την ενίσχυση.Λειτουργείτε με γάντια και αλλάζετε συχνά και μην ανοίγετε το σωλήνα PCR μετά την ενίσχυση.