Ένζυμα UDG/UNG
Η UDG (γλυκοζυλάση DNA ουρακίλης) μπορεί να καταλύσει την υδρόλυση του Ν-γλυκοσιδικού δεσμού μεταξύ της βάσης ουρακίλης και της ραχοκοκαλιάς σακχάρου-φωσφορικού στο ssDNA και το dsDNA.Μπορεί εύκολα να ελέγξει τη ρύπανση από αεροζόλ και είναι κατάλληλο για κοινά συστήματα μοριακής βιολογίας όπως PCR, qPCR, RT-qPCR και LAMP.
Προδιαγραφές
| Κεντρικός υπολογιστής έκφρασης | Ανασυνδυασμένο E. coli με γονίδιο γλυκοζυλάσης DNA ουρακίλης |
| Μοριακό βάρος | 24. 8kDa |
| Καθαρότητα | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Απενεργοποίηση θερμότητας | 95℃, 5~10 λεπτά |
| Ορισμός μονάδας | Μία μονάδα (U) ορίζεται ως η ποσότητα του ενζύμου που απαιτείται για την κατάλυση της υδρόλυσης του dsDNA που περιέχει l μg dU σε 30 λεπτά στους 25℃. |
Αποθήκευση
Το προϊόν πρέπει να φυλάσσεται στους -25℃~-15°C για δύο χρόνια.
Οδηγίες
1.Παρασκευή του μίγματος αντίδρασης PCR σύμφωνα με το ακόλουθο σύστημα
| Συστατικά | Όγκος (μL) | Τελική συγκέντρωση |
| 10×Ρυθμιστικό διάλυμα PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Λύση |
| Πρότυπο DNA | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | Έως 50 | - |
Σημείωση: Σύμφωνα με τις πειραματικές απαιτήσεις, η τελική συγκέντρωση του dUTP μπορεί να ρυθμιστεί μεταξύ 0,2-0,6 mmol/L και μπορεί να προστεθεί επιλεκτικά 0,2 mmol/L dTTP.
2.Διαδικασία ενίσχυσης
| Βήμα κύκλου | Θερμοκρασία | χρόνος | Κύκλοι |
| Υποβάθμιση προτύπου που περιέχει dU | 25℃ | 10 λεπτά | 1 |
| Ενεργοποίηση UDG, αρχική μετουσίωση προτύπου | 95℃ | 5~10 λεπτά | 1 |
| Μετουσίωσης | 95℃ | 10 δευτ |
30-35 |
| Ανόπτηση | 60℃ | 20 δευτ | |
| Επέκταση | 72℃ | 30 δευτερόλεπτα/kb | |
| Τελική παράταση | 72℃ | 5 λεπτά | 1 |
Σημείωση: Ο χρόνος αντίδρασης στους 25°C μπορεί να ρυθμιστεί εντός 5-10 λεπτών σύμφωνα με τις πειραματικές απαιτήσεις.
Σημειώσεις
1.Το UDG είναι ενεργό στα περισσότερα ρυθμιστικά διαλύματα αντίδρασης PCR.
2.Τα ένζυμα πρέπει να φυλάσσονται σε παγοθήκη ή σε παγόλουτρο όταν χρησιμοποιούνται και θα πρέπει να φυλάσσονται στους -20°C αμέσως μετά τη χρήση.
3.Φορέστε τα απαραίτητα ΜΑΠ, όπως παλτό εργαστηρίου και γάντια, για να διασφαλίσετε την υγεία και την ασφάλειά σας!
