Αναστολέας Rnase (χωρίς γλυκερόλη)
Ο αναστολέας RNase ποντικού είναι ένας ανασυνδυασμένος αναστολέας RNase ποντικού που εκφράζεται και καθαρίζεται από E.coli.Προσδένεται στη RNase A, B ή C σε αναλογία 1:1 μέσω μη ομοιοπολικού δεσμού, αναστέλλοντας έτσι τη δραστηριότητα των τριών ενζύμων και προστατεύοντας το RNA από την αποικοδόμηση.Ωστόσο, δεν είναι αποτελεσματικό έναντι της RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ή RNase από Aspergillus.Ο αναστολέας RNase ποντικού δοκιμάστηκε με RT-PCR, RT-qPCR και IVT mRNA, και ήταν συμβατός με διάφορες εμπορικές Αντίστροφες μεταγραφάσες, DNA πολυμεράσες και RNA πολυμεράσες.
Σε σύγκριση με τους ανθρώπινους αναστολείς RNase, ο αναστολέας RNase ποντικού δεν περιέχει δύο κυστεΐνες που είναι ιδιαίτερα ευαίσθητες στην οξείδωση που προκαλεί αδρανοποίηση του αναστολέα.Αυτό το καθιστά σταθερό σε χαμηλές συγκεντρώσεις DTT (λιγότερο από 1 mM).Αυτό το χαρακτηριστικό το καθιστά κατάλληλο για χρήση σε αντιδράσεις όπου οι υψηλές συγκεντρώσεις DTT είναι δυσμενείς για την αντίδραση (π.χ. RT-PCR σε πραγματικό χρόνο).
Aεφαρμογή
Αυτό το προϊόν μπορεί να χρησιμοποιηθεί ευρέως σε οποιοδήποτε πείραμα όπου είναι δυνατή η παρεμβολή RNase για να αποφευχθεί η αποικοδόμηση του RNA, όπως:
1. Σύνθεση cDNA πρώτου κλώνου, RT-PCR, RT-qPCR, κ.λπ.
2.Προστασία του RNA από αποικοδόμηση σε in-vitro μεταγραφή/μετάφραση (π.χ. ιική αντιγραφή in vitro).
3.Αναστολή της δράσης της RNase κατά την απομόνωση και τον καθαρισμό του RNA.
Συνθήκες αποθήκευσης
Αποθήκευση στους -25-15℃.
Κύκλοι κατάψυξης-απόψυξης ≤ 5 φορές.
Ισχύει για 1 έτος.
Ορισμός μονάδας
Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα του αναστολέα RNase που απαιτείται για την αναστολή της δραστηριότητας 5 ng RNase A κατά 50%.
Μοριακό βάρος
Ο αναστολέας RNase (χωρίς γλυκερόλη) είναι μια πρωτεΐνη 50 kDa.
Ελεγχος ποιότητας
Εξωνουκλεάση Δραστηριότητα:
Η επώαση 40 U ενζύμου με 1 μg DNA χώνευσης λ-Hind III για 16 ώρες στους 37°C δεν οδήγησε σε ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση του DNA όπως προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση γέλης.
Δραστηριότητα ενδονουκλεάσης:
Η επώαση 40 U ενζύμου με 1 μg λ DNA για 16 ώρες στους 37°C οδήγησε σε μη ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση του DNA όπως προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση γέλης.
Nicking Δραστηριότητα:
Η επώαση 40 U ενζύμου με 1 μg pBR322 για 16 ώρες στους 37℃ οδήγησε σε μη ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση του DNA όπως προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση γέλης.
RNase Δραστηριότητα:
Η επώαση 40 U ενζύμου με 1,6 μg MS2 RNA για 4 ώρες στους 37 ℃ οδήγησε σε μη ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση του RNA όπως προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση γέλης.
E.coli DNA:
40 U του ενζύμου ανιχνεύονται με TaqMan qPCR.Το DNA του E.coli είναι ≤ 0, 1 pg/40 U.
Nότεs
1. Μην ανακινείτε ή ανακατεύετε βίαια για να αποτρέψετε την αδρανοποίηση του ενζύμου.
Ο αναστολέας 2.RNase είναι ενεργός σε θερμοκρασίες που κυμαίνονται από 25℃ έως 55℃ και αδρανοποιείται στους ≥65℃.
3. Η δράση της RNase H, RNase 1 και RNase T1 δεν αναστέλλεται.
4. Το εύρος του pH για την αναστολή της δραστηριότητας RNase είναι ευρύ (ενεργό σε pH 5-9), εμφανίζοντας μέγιστη δραστικότητα σε pH 7-8.
