Ευαίσθητο σε θερμοκρασία UNG
Το Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) είναι ένα λαμβανόμενο με ανασυνδυασμένη έκφραση σε E. coli.Το ένζυμο καταλύει την απελευθέρωση ελεύθερης ουρακίλης από μονόκλωνο και δίκλωνο DNA που περιέχει ουρακίλη και είναι ανενεργό έναντι του RNA.Σε σύγκριση με το συμβατικό ένζυμο UNG προέλευσης γονιδίου E. coli, το ένζυμο TS-UNG έχει υψηλότερη δραστηριότητα σε χαμηλές θερμοκρασίες (20℃~37℃) και είναι ευαίσθητο στη θερμοκρασία και απενεργοποιείται εύκολα (50℃), αποφεύγοντας την υποβάθμιση της ενίσχυσης που περιέχει dUTP προϊόντα σε θερμοκρασία δωματίου από την υπολειμματική δραστηριότητα που μπορεί να παραμείνει μετά την αδρανοποίηση του συμβατικού ενζύμου UNG.Επομένως, το ένζυμο TS-UNG δεν είναι μόνο κατάλληλο για αντίδραση πρόληψης μόλυνσης PCR, αλλά ταιριάζει επίσης καλά με το πρόγραμμα ενίσχυσης RT-PCR και μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε αντίδραση πρόληψης μόλυνσης RT-PCR.
Προτεινόμενη Εφαρμογή
Ενίσχυση πρόληψης μόλυνσης
Κατάσταση Αποθήκευσης
-20°C για μακροχρόνια αποθήκευση, πρέπει να αναμειγνύεται καλά πριν από τη χρήση, να αποφεύγεται η συχνή κατάψυξη-απόψυξη.
Αποθηκευτικός χώρος αποθήκευσης
20 mM Tris-HCl (ρΗ 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Σταθεροποιητής, 50% Γλυκερίνη.
Ορισμός μονάδας
Η ποσότητα του ενζύμου που απαιτείται για την αποικοδόμηση 1 μg μονόκλωνου DNA που περιέχει βάσεις dU σε 1 ώρα στους 37°C είναι 1 μονάδα δραστικότητας (U).
Ελεγχος ποιότητας
1.ηλεκτροφορητική καθαρότητα SDS-PAGE μεγαλύτερη από 98%
2.Δραστηριότητα υποβάθμισης, έλεγχος από παρτίδα σε παρτίδα, σταθερότητα
3.Καμία εξωγενής δραστηριότητα νουκλεάσης, καμία εξωγενής ενδονουκλεάση ή μόλυνση από εξωνουκλεάση.
Οδηγίες
| Συστατικά | Όγκος (μL) | Τελική συγκέντρωση |
| 10 × Ρυθμιστικό διάλυμα PCR (χωρίς dNTP, Mg²+Ελεύθερος) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μΜ |
| dUTP (αντικαταστήστε το dTTP) | - | 200-600 μΜ |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Μίγμα ασταριούένα | 2 | 1× |
| Πρότυπο | - | ＜1μg/αντίδραση |
| ddH2O | Μέχρι 50 | - |
Σημείωση: α: Εάν χρησιμοποιείται για qPCR/qRT-PCR, ο φθορίζων ανιχνευτής θα πρέπει να προστεθεί στο σύστημα αντίδρασης.Συνήθως, μια τελική συγκέντρωση εκκινητή 0,2 μΜ μπορεί να δώσει καλά αποτελέσματα.όταν η απόδοση της αντίδρασης είναι κακή, η συγκέντρωση του εκκινητή μπορεί να ρυθμιστεί στην περιοχή από 0,2-1 μΜ.Συνήθως, η συγκέντρωση του ανιχνευτή βελτιστοποιείται στην περιοχή από 0,1-0,3 μM.Μπορούν να πραγματοποιηθούν πειράματα βαθμίδωσης συγκέντρωσης για να βρεθεί ο καλύτερος συνδυασμός εκκινητή και ανιχνευτή.
Σημειώσεις
1.Η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης του ενζύμου TS-UNG είναι σχετικά χαμηλή και μπορεί να βελτιστοποιηθεί στην περιοχή από 20℃~37℃, η δόση του ενζύμου και ο χρόνος αντίδρασης μπορούν να βελτιστοποιηθούν στην περιοχή 0,1~0,5 U, 5~ 10 λεπτά;και το ένζυμο μπορεί να απενεργοποιηθεί στη διαδικασία της αντίστροφης μεταγραφής.
2.Είναι κατάλληλο για PCR και RT-PCR για την πρόληψη της μόλυνσης.
3.Αποφύγετε τη συχνή κατάψυξη-απόψυξη και μην την εκθέτετε σε μεγάλες διακυμάνσεις της θερμοκρασίας.
4.Διαφορετικά γονίδια προς ενίσχυση έχουν διαφορετική απόδοση χρήσης του dUTP και ευαισθησία στο ένζυμο UNG, επομένως, εάν η χρήση του συστήματος UNG οδηγεί σε μείωση της ευαισθησίας ανίχνευσης, το σύστημα αντίδρασης θα πρέπει να προσαρμοστεί και να βελτιστοποιηθεί. Εάν χρειάζεστε τεχνική υποστήριξη, επικοινωνήστε η ΕΤΑΙΡΕΙΑ μας.
