Κιτ εξαγωγής DNA/RNA ιού
Αυτό το κιτ είναι κατάλληλο για την ταχεία εξαγωγή ιικού DNA/RNA υψηλής καθαρότητας από δείγματα όπως ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα, περιβαλλοντικά επιχρίσματα, υπερκείμενα κυτταροκαλλιέργειας και υπερκείμενα ομογενοποιημένα ιστών.Το κιτ βασίζεται στην τεχνολογία καθαρισμού μεμβράνης πυριτίου που εξαλείφει την ανάγκη χρήσης οργανικών διαλυτών φαινόλης/χλωροφόρμιου ή χρονοβόρας κατακρήμνισης αλκοόλης για την εξαγωγή ιικού DNA/RNA υψηλής ποιότητας.Τα νουκλεϊκά οξέα που λαμβάνονται είναι απαλλαγμένα από ακαθαρσίες και έτοιμα για χρήση σε πειράματα κατάντη όπως αντίστροφη μεταγραφή, PCR, RT-PCR, PCR πραγματικού χρόνου, προσδιορισμός αλληλουχίας επόμενης γενιάς (NGS) και στύπωμα Northern.
Συνθήκες αποθήκευσης
Αποθηκεύστε στους 15 ~ 25 ℃ και μεταφέρετε σε θερμοκρασία δωματίου
Συστατικά
| Συστατικά | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| Χωρίς RNase ddH2 O | 6 ml |
| Στήλες RNA FastPure | 100 |
| Σωληνάρια συλλογής (2ml) | 100 |
| Σωληνάρια συλλογής χωρίς RNase (1 ,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Παρέχετε ένα περιβάλλον για λύση και δέσμευση.
Buffer RW:Αφαιρέστε τις υπολειμματικές πρωτεΐνες και άλλες ακαθαρσίες.
ddH2O χωρίς RNase:Εκλούστε DNA/RNA από τη μεμβράνη στη στήλη spin.
Στήλες RNA FastPure:Προσροφήστε συγκεκριμένα DNA/RNA.
Σωληνάρια συλλογής 2 ml:Συλλέξτε το διήθημα.
Σωληνάρια συλλογής χωρίς RNase 1,5 ml:Συλλέξτε DNA/RNA.
Εφαρμογές
Ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα, περιβαλλοντικά επιχρίσματα, υπερκείμενα κυτταροκαλλιέργειας και υπερκείμενα ομογενοποιημένα ιστών.
Αυτοπροετοιμασμένο Materals
Ρύγχη πιπέτας χωρίς RNase, φυγοκεντρικοί σωλήνες 1,5 ml χωρίς RNase, φυγόκεντρος, αναμικτήρας vortex και πιπέτες.
Πειραματική Διαδικασία
Εκτελέστε όλα τα παρακάτω βήματα σε ένα ντουλάπι βιοασφάλειας.
1. Προσθέστε 200 μl δείγματος σε σωλήνα φυγοκέντρησης χωρίς RNase (συμπληρώστε με PBS ή 0,9% NaCl σε περίπτωση ανεπαρκούς δείγματος), προσθέστε 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος VL, ανακατέψτε καλά με στροβιλισμό για 15 – 30 δευτερόλεπτα και φυγοκεντρήστε για λίγο για να συλλέξετε το μείγμα στο κάτω μέρος του σωλήνα.
2. Τοποθετήστε τις στήλες FastPure RNA σε Σωληνάρια συλλογής 2 ml.Μεταφέρετε το μείγμα από το Βήμα 1 στις Στήλες RNA FastPure, φυγοκεντρήστε στις 12.000 rpm (13.400 × g) για 1 λεπτό και απορρίψτε το διήθημα.
3. Προσθέστε 600 μl ρυθμιστικού διαλύματος RW στις στήλες RNA FastPure, φυγοκεντρήστε στις 12.000 rpm (13.400 × g) για 30 δευτερόλεπτα και απορρίψτε το διήθημα.
4. Επαναλάβετε το βήμα 3.
5. Φυγοκεντρήστε την άδεια στήλη στις 12.000 rpm (13.400 × g) για 2 λεπτά.
6. Μεταφέρετε προσεκτικά τις στήλες FastPure RNA σε νέα Σωληνάρια συλλογής χωρίς RNase 1,5 ml (παρέχονται στο κιτ) και προσθέστε 30 – 50 μl ddH2O χωρίς RNase στο κέντρο της μεμβράνης χωρίς να αγγίξετε τη στήλη.Αφήστε να παραμείνει σε θερμοκρασία δωματίου για 1 λεπτό και φυγοκεντρήστε στις 12.000 rpm (13.400 × g) για 1 λεπτό.
7. Απορρίψτε τις στήλες RNA FastPure.Το DNA/RNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας για επακόλουθες προσδιορισμούς ή να αποθηκευτεί στους -30~ -15°C για σύντομο χρονικό διάστημα ή στους -85~-65°C για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα.
Σημειώσεις
Μόνο για ερευνητική χρήση.Δεν προορίζεται για χρήση σε διαγνωστικές διαδικασίες.
1. Εξισορροπήστε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου εκ των προτέρων.
2. Οι ιοί είναι εξαιρετικά μολυσματικοί.Βεβαιωθείτε ότι έχουν ληφθεί όλες οι απαραίτητες προφυλάξεις ασφαλείας πριν από το πείραμα.
3. Αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη του δείγματος, καθώς αυτό μπορεί να οδηγήσει σε αποικοδόμηση ή μειωμένη απόδοση του εξαγόμενου ιικού DNA/RNA.
4. Ο αυτο-παρασκευασμένος εξοπλισμός περιλαμβάνει ρύγχη πιπέτας χωρίς RNase, σωλήνες φυγοκέντρησης χωρίς RNase 1,5 ml, φυγόκεντρο, αναμικτήρα vortex και πιπέτες.
5. Όταν χρησιμοποιείτε το κιτ, φοράτε εργαστηριακή επίστρωση, γάντια από λατέξ μιας χρήσης και μάσκα μιας χρήσης και χρησιμοποιείτε αναλώσιμα χωρίς RNase για να ελαχιστοποιήσετε τον κίνδυνο μόλυνσης από RNase.
6. Εκτελέστε όλα τα βήματα σε θερμοκρασία δωματίου, εκτός εάν ορίζεται διαφορετικά.
Μηχανισμός & Ροή Εργασίας
