Hotstart Taq DNA Polymerase
Η Hot Start Taq DNA Polymerase (Τροποποίηση αντισώματος) είναι μια θερμοσταθερή DNA πολυμεράση θερμής εκκίνησης από το Thermus aquaticus YT-1, που έχει δραστηριότητα πολυμεράσης 5'→3' και δραστηριότητα ενδονουκλεάσης κρημνού 5'.Η θερμής εκκίνησης Taq DNA πολυμεράση είναι μια Taq DNA πολυμεράση που τροποποιείται από θερμοευαίσθητα αντισώματα Taq.Η τροποποίηση αντισωμάτων αύξησε την ειδικότητα, την ευαισθησία και την απόδοση της PCR.
Συστατικά
| Συστατικό | HC1012Α-01 | HC1012Α-02 | HC1012Α-03 | HC1012Α-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 mL | 4×10 mL | 4×50 mL | 5×400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Τροποποιημένο αντίσωμα) (5 U/μL) | 0,1 mL | 1 mL | 5 mL | 10×5 mL |
Εφαρμογές
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 στους 25℃), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM διθειοθρεϊτόλη, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 και 50% γλυκερόλη.
Κατάσταση Αποθήκευσης
Μεταφορά κάτω από 0°C και αποθήκευση στους -25°C~-15°C.
Ορισμός μονάδας
Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα του ενζύμου που ενσωματώνει 15 nmol dNTP σε αδιάλυτο σε οξύ υλικό σε 30 λεπτά στους 75°C.
Ελεγχος ποιότητας
1.EndΔραστηριότητα onuclease:Η επώαση 20 U ενζύμου με 4 μg pUC19 DNA για 4 ώρες στους 37℃ οδήγησε σε μη ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση του DNA όπως προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση γέλης.
2.5 kb Lambda PCR:25 Κύκλοι PCR ενίσχυσης 5 ng λάμδα DNA με 1,25 μονάδες Taq DNA πολυμεράσης παρουσία 200 μΜ dNTPs και 0,2 μΜ εκκινητών καταλήγουν στο αναμενόμενο προϊόν των 5 kb.
3.Δραστηριότητα εξωνουκλεάσης:Η επώαση μιας αντίδρασης 50 μl που περιέχει τουλάχιστον 12,5 U Taq DNA Πολυμεράσης με 10 nmol ολιγονουκλεοτιδίου 5'-FAM για 30 λεπτά στους 37℃ δεν αποδίδει ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση.
4.Δραστηριότητα RNase:Η επώαση 10 μL αντίδρασης που περιέχει 20 U ενζύμου με 1 μg μεταγραφών RNA για 2 ώρες στους 37°C οδήγησε σε μη ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση του RNA όπως προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση γέλης.
5.Απενεργοποίηση θερμότητας:Οχι.
Σύστημα Αντίδρασης
| Συστατικά | Ενταση ΗΧΟΥ |
| Πρότυπο DNAa | προαιρετικός |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| Μίγμα dNTP (10mM το καθένα) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseσι(5 U/μL) | 0,125 μL |
| Νερό χωρίς νουκλεάση | Έως 25 μL |
Σημειώσεις:
1) α.
| DNA | Ποσό |
| Γονιδιωματικό | 1 ng-1 μg |
| Πλασμίδιο ή Ιικό | 1 pg-1 ng |
2) β.Η βέλτιστη συγκέντρωση της Taq DNA Polymerase μπορεί να κυμαίνεται από 5-50 μονάδες/mL (0,1-0,5 μονάδες/25 μL αντίδραση) σε εξειδικευμένες εφαρμογές.
Πρωτόκολλο θερμικού κύκλου
PCR
| Βήμα | Θερμοκρασία(°C) | χρόνος | Κύκλοι |
| Αρχική μετουσίωσηa | 95 ℃ | 1-3 λεπτά | - |
| Μετουσίωσης | 95 ℃ | 15-30 δευτ | 30-35 Κύκλοι |
| Ανόπτησησι | 45-68 ℃ | 15-60 δευτ | |
| Επέκταση | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Τελική επέκταση | 68 ℃ | 5 λεπτά | - |
Σημειώσεις:
1) Μια αρχική μετουσίωση 1 λεπτού στους 95°C είναι επαρκής για τις περισσότερες ενισχύσεις.Για δύσκολα πρότυπα, συνιστάται μεγαλύτερη μετουσίωση 2-3 λεπτών στους 95°C.Με την PCR αποικίας, συνιστάται μια αρχική μετουσίωση 5 λεπτών στους 95°C.
2) Το βήμα ανόπτησης είναι τυπικά 15-60 δευτερόλεπτα.Η θερμοκρασία ανόπτησης βασίζεται στο Tm του ζεύγους εκκινητών και είναι τυπικά 45-68℃.
