2×HiF Taq plus Master Mix
Αριθμός γάτας: HCR2014B
Το HIF Taq plus Master Mix (With Dye) είναι ένα έτοιμο προς χρήση 2× προαναμεμειγμένο διάλυμα που περιέχει Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs και βελτιστοποιημένο ρυθμιστικό διάλυμα.Δύο μονοκλωνικά αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου που αναστέλλουν τη δραστηριότητα πολυμεράσης και τη δραστηριότητα 3'→5'εξωνουκλεάσης προστίθενται στο κύριο μείγμα για εύκολη και εξαιρετικά ειδική Hot Start PCR.Ο παράγοντας επέκτασης προστίθεται στο κύριο μείγμα για να δώσει στο ένζυμο μια μεγάλη ικανότητα ενίσχυσης θραυσμάτων, το μήκος της ενίσχυσης μπορεί να είναι έως και 13 kb, το ένζυμο έχει δραστηριότητα 5'→3' DNA πολυμεράσης και 3'→5' δραστηριότητα εξωνουκλεάσης, η πιστότητά της είναι 83 φορές μεγαλύτερη από αυτή της Taq DNA πολυμεράσης, η οποία είναι 9 φορές μεγαλύτερη από αυτή της συνηθισμένης DNA πολυμεράσης.Είναι κατάλληλο για ενίσχυση σύνθετων προτύπων, το προϊόν ενίσχυσης είναι αμβλύ άκρο.
Το 2×HIF Taq plus Master Mix (With Dye) έχει τα πλεονεκτήματα της γρήγορης και εύκολης, υψηλής ευαισθησίας, ισχυρής ειδικότητας, καλής σταθερότητας κ.λπ., το σύστημα αντίδρασης χρειάζεται μόνο να προσθέσει εκκινητές και πρότυπα και μπορεί να ενισχυθεί με δύο πρωτοκόλλου βημάτων, απλοποιώντας τα πειραματικά βήματα και εξοικονομώντας χρόνο.Αυτό το προϊόν περιέχει βαφές δείκτη ηλεκτροφόρησης και τα προϊόντα PCR μπορούν να χρησιμοποιηθούν απευθείας για ηλεκτροφόρηση.Επιπλέον, το προϊόν περιέχει επίσης έναν ειδικό προστατευτικό παράγοντα, έτσι ώστε το κύριο μείγμα να μπορεί να διατηρεί σταθερή δραστηριότητα μετά από επαναλαμβανόμενη κατάψυξη-απόψυξη.
Συνθήκες αποθήκευσης
Τα προϊόντα πρέπει να φυλάσσονται στους -25~-15℃ για 1 έτος.
Προδιαγραφές
| Προσδιορισμός προϊόντος | Master Mix |
| Συγκέντρωση | 2× |
| Hot Start | Ενσωματωμένο Hot Start |
| Εξέχω | Αμβλύς |
| Ταχύτητα αντίδρασης | Ταχύς |
| Μέγεθος (Τελικό προϊόν) | Έως 13 kb |
| Προϋποθέσεις μεταφοράς | Ξηρό πάγο |
| Τύπος Προϊόντος | Προμίγματα PCR υψηλής πιστότητας |
Οδηγίες
1.Σύστημα αντίδρασης PCR
| Συστατικά | Όγκος (μL) |
| Πρότυπο DNA | Κατάλληλος |
| Εμπρόσθιο αστάρι (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | έως 50 |
2.Συνιστώμενη χρήση διαφορετικών προτύπων
| Τύπος προτύπου | Ενισχύστε θραύσματα από 1 kb σε 10 kb |
| Γονιδιωματικό DNA | 50 ng-200 ng |
| Πλασμίδιο ή Ιικό DNA | 10 pg-20 ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (Μην υπερβαίνετε το 10% του τελικού όγκου αντίδρασης PCR) |
3.Πρωτόκολλο ενίσχυσης
1) Πρωτόκολλο δύο βημάτων (πρότυπο πολυπλοκότητας)
| Βήμα κύκλου | Θερμ. | χρόνος | Κύκλοι |
| Αρχική μετουσίωση | 98℃ | 3 λεπτά | 1 |
| Μετουσίωσης | 98℃ | 10 δευτ | 30-35 |
| Επέκταση | 68℃ | 30 sec/kb | |
| Τελική παράταση | 72℃ | 5 λεπτά | 1 |
2) Πρωτόκολλο τριών βημάτων (κανονικό πρωτόκολλο)
| Βήμα κύκλου | Θερμ. | χρόνος | Κύκλοι |
| Αρχική μετουσίωση | 98℃ | 3 λεπτά | 1 |
| Μετουσίωσης | 98℃ | 10 δευτ | 30-35 |
| Ανόπτηση | 60℃ | 20 δευτ | |
| Επέκταση | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Τελική παράταση | 72℃ | 5 λεπτά | 1 |
3) Πρωτόκολλο ανόπτησης κλίσης (πρότυπο πολυπλοκότητας)
| Βήμα κύκλου | Θερμοκρασία | χρόνος | Κύκλοι |
| Αρχική μετουσίωση | 98℃ | 3 λεπτά | 1 |
| Μετουσίωσης | 98℃ | 10 δευτ | 15 (1℃ μείωση ανά κύκλο) |
| Διαβάθμιση ανόπτησης | 70-55℃ | 20 δευτ | |
| Επέκταση | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Μετουσίωσης | 98℃ | 10 δευτ |
20 |
| Ανόπτηση | 55℃ | 20 δευτ | |
| Επέκταση | 72℃ | 30 sec/kb | |
| Τελική παράταση | 72℃ | 5 λεπτά | 1 |
Λειτουργίες κάτω από διαφορετικό πρωτόκολλο ενίσχυσης
| Πρωτόκολλοl | Δύο βήματα | Τριών βημάτων | Διαβάθμιση ανόπτησης |
| Spec. | γρήγορα | Μεσαίο | αργός |
| Ιδιαιτερότητα | υψηλός | Μεσαίο | υψηλός |
| Απόδοση PCR | Μεσαίο | υψηλός | Μεσαίο |
| Ρυθμός ανίχνευσης | υψηλός | Μεσαίο | υψηλός |
Σημειώσεις
Φορέστε τα απαραίτητα ΜΑΠ, όπως παλτό εργαστηρίου και γάντια, για να διασφαλίσετε την υγεία και την ασφάλειά σας!
