One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Αριθμός γάτας: HCB5140A
Το One Step RT-qPCR Syber Green Premix είναι για ποσοτικό προσδιορισμό φθορισμού με βάση τη βαφή SYBR Green I.Χρησιμοποιώντας ειδικούς για το γονίδιο εκκινητές, οι αντιδράσεις αντίστροφης μεταγραφής και qPCR ολοκληρώνονται σε ένα σωληνάριο, εξαλείφοντας την ανάγκη για επαναλαμβανόμενες εργασίες ανοίγματος καπακιού και πιπέτας, βελτιώνοντας σημαντικά την αποτελεσματικότητα της ανάλυσης και μειώνοντας τον κίνδυνο μόλυνσης.Για δείγματα RNA, το κιτ χρησιμοποιεί ανθεκτική στη θερμότητα Αντίστροφη Μεταγραφάση για αποτελεσματική σύνθεση cDNA και HotStart Taq DNA Polymerase για ποσοτική ενίσχυση.Στο πλαίσιο του βελτιστοποιημένου συστήματος προσωρινής αποθήκευσης, η ευαισθησία του κιτ μπορεί να είναι τόσο υψηλή όσο 0,1 pg για στόχους υψηλής έκφρασης και έως και 1 pg για στόχους μέτριας έκφρασης.Το κιτ είναι κατάλληλο για την ενίσχυση και τον ποσοτικό προσδιορισμό δειγμάτων DNA.Επιτρέπει την ευαίσθητη ανίχνευση και ποσοτικοποίηση νουκλεϊκών οξέων από διαφορετικά φυτικά και ζωικά δείγματα, κύτταρα και μικροοργανισμούς.
Συστατικά
| No | Ονομα | Ενταση ΗΧΟΥ | Ενταση ΗΧΟΥ |
| 1 | Προηγμένη προσωρινή μνήμη | 250 μL | 2×1,25 mL |
| 2 | Advanced Enzyme Mix | 20 μL | 200 μL |
| 3 | Χωρίς RNase H2O | 250 μL | 2×1,25 mL |
Συνθήκες αποθήκευσης
Αυτό το προϊόν πρέπει να φυλάσσεται στους -25~-15℃ μακριά από το φως για 1 χρόνο.
Οδηγίες
1.Διαμόρφωση συστήματος αντίδρασηςd
| Συστατικά | Όγκος (μL) | Όγκος (μL) | Τελική συγκέντρωση |
| Προηγμένη προσωρινή μνήμη | 12.5 | 25 | 1× |
| Advanced Enzyme Mix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Πίνακας RNAb | X | X | - |
| Χωρίς RNase H2Οc | έως 25 | έως 50 | - |
Σημειώσεις:
1) α.ΤΗ τελική συγκέντρωση του εκκινητή ήταν 0,2 μmol/L, η οποία μπορούσε επίσης να ρυθμιστεί μεταξύ 0,1 και 1 μmol/L ανάλογα με την περίπτωση.
2) β.Το αντιδραστήριο είναι εξαιρετικά ευαίσθητο, με ολικό RNA στο εύρος 1 pg-1μg και η δοκιμή ανθρώπινων δειγμάτων έδειξε βέλτιστη είσοδο 1 pg-100 ng, ελέγχοντας μια συνολική τιμή Ct στην περιοχή από 15-30 ανάλογα με την περίπτωση.
3) γ.Συνιστάται η χρήση 20μL ή 50μL για να διασφαλιστεί η εγκυρότητα και η αναπαραγωγιμότητα της ενίσχυσης του γονιδίου στόχου.
4) δ.Παρακαλούμε προετοιμάστε στον εξαιρετικά καθαρό πάγκο και χρησιμοποιήστε μύτες και σωλήνες αντίδρασης χωρίς υπολείμματα νουκλεάσης.συνιστώνται συμβουλές με φυσίγγια φίλτρου.Αποφύγετε τη διασταυρούμενη μόλυνση και τη μόλυνση από αεροζόλ.
2.Πρόγραμμα αντίδρασης
| Βήμα κύκλου | Θερμ. | χρόνος | Κύκλοι |
| Αντίστροφη μεταγραφή | 50℃a | 6 λεπτά | 1 |
| Αρχική μετουσίωση | 95℃ | 5 λεπτά | 1 |
| Αντίδραση ενίσχυσης | 95℃ | 15 δευτ | 40 |
| 60℃b | 30 δευτ | ||
| Στάδιο καμπύλης τήξης | Προεπιλογές οργάνου | 1 | |
Σημειώσεις:
1) α.Η θερμοκρασία αντίστροφης μεταγραφής μπορεί να επιλεγεί μεταξύ 50-55°C σύμφωνα με τις πειραματικές ανάγκες.Για δείγματα DNA, η διαδικασία αντίστροφης μεταγραφής μπορεί να παραλειφθεί.
2) β.Σε ειδικές περιπτώσεις η θερμοκρασία ανόπτησης/επέκτασης μπορεί να ρυθμιστεί σύμφωνα με την τιμή Tm του ασταριού, συνιστάται 60°C.
Σημειώσεις
1. Αυτό το προϊόν προορίζεται μόνο για ερευνητική χρήση.
2. Παρακαλούμε να λειτουργείτε με παλτό εργαστηρίου και γάντια μιας χρήσης, για την ασφάλειά σας.
