RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Αυτό το προϊόν περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης, RT-Enzymes Mix (Bst DNA πολυμεράση και ανθεκτική στη θερμότητα αντίστροφη μεταγραφάση), λυοφιλοποιημένα προστατευτικά και χρωμογόνα συστατικά βαφής.Για χρήση, απλώς χρησιμοποιήστε το ρυθμιστικό διάλυμα, το ένζυμο αντίδρασης και ο εκκινητής αναμειγνύονται και προστίθενται στο πρότυπο.Η προσθήκη λυοφιλοποιημένου προστατευτικού μπορεί να είναι ευθεία.Συνδέθηκε με λυοφιλοποιητή και λυοφιλοποιήθηκε, και μόνο οι εκκινητές και τα εκμαγεία προστέθηκαν όταν χρησιμοποιήθηκαν.Αυτό το κιτ παρέχει μια γρήγορη, σαφή οπτική ανίχνευση της ενίσχυσης, η οποία αρνητική αντίδραση υποδεικνύεται με κόκκινο και η θετική αντίδραση υποδεικνύεται με αλλαγή σε κίτρινο.
Συστατικό
| Συστατικό | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ενίσχυσης με μεσολάβηση βρόχου (με βαφή) | 0,96 mL | 4,80 mL×2 | 9,60 mL×10 |
| Μίγμα RT-Enzymes | 270 μL | 2,70 mL | 2,70 mL×10 |
| Λυοφιλοποιημένο προστατευτικό | 0,96 mL×2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
Εφαρμογές
Για ισοθερμική ενίσχυση DNA ή RNA.
Συνθήκες αποθήκευσης
Μεταφέρεται με ξηρό πάγο, αποθηκεύεται στους -25~ -15℃.Αποφύγετε τη συχνή κατάψυξη-απόψυξη, το προϊόν ισχύει για 12 μήνες.
Πρωτόκολλο
1.Αποψύξτε το ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης που θα χρησιμοποιηθεί σε θερμοκρασία δωματίου.Αναδεύστε για λίγο ή αναποδογυρίστε τους σωλήνες αρκετές φορές για να αναμειχθούν καλά και μετά φυγοκεντρήστε για να συλλέξετε το υγρό στο κάτω μέρος του σωλήνα.
2.Προετοιμασία συστήματος αντίδρασης.Αυτό το αντιδραστήριο μπορεί να παρασκευαστεί σε δύο συστήματα αντίδρασης, μείγμα υγρής αντίδρασης και μίγμα λυοφιλοποιημένου συστήματος.
1) Προετοιμάστε υγρό μείγμα αντίδρασης
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ενίσχυσης με μεσολάβηση βρόχου (με βαφή) | 10 μL |
| Μίγμα RT-Enzymes | 2,8 μL |
| 10 × Μίγμα ασταριούa | 5 μL |
| Πρότυπα DNA/RNA b | × μL |
| Νερό χωρίς νουκλεάση | Έως 50 μL |
2) Μίγμα συστήματος λυοφιλοποίησης
① Προετοιμάστε λυοφιλοποιημένο μείγμα
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ενίσχυσης με μεσολάβηση βρόχου (με βαφή) | 10 μL |
| Λυοφιλοποιημένο προστατευτικό | 20 μL |
| Μίγμα RT-Enzymes | 2,8 μL |
| Νερό χωρίς νουκλεάση | Έως 50 μL |
② Λυοφιλοποίηση: Το παρασκευασμένο Μίγμα λυοφιλοποιήθηκε σε σύστημα 50μL
③ Προετοιμάστε το μείγμα αντίδρασης
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ |
| Λυοφιλοποιημένο μίγμα | 1 τεμάχιο |
| 10 × Μίγμα ασταριούa | 5 μL |
| Πρότυπα DNA/RNA b | × μL |
| Νερό χωρίς νουκλεάση | Έως 50 μL |
Σημειώσεις:
1) α.10×Μίγμα εκκινητών: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM βρόχου F/B;
2) β.Το DEPC (υδατοδιαλυτό) συνιστάται για templ νουκλεϊκού οξέος.
1.Επωάστε στους 65°C για 30-45 λεπτά, η οποία μπορεί να παραταθεί κατάλληλα ανάλογα με την αλλαγή χρώματος Χρόνος αντίδρασης.
2.Σύμφωνα με γυμνό μάτι, το κίτρινο ήταν θετικό και το κόκκινο ήταν αρνητικό.
Σημειώσεις
1.Μπορεί να εμφανιστεί αλάτι στον πυθμένα του ρυθμιστικού σωλήνα, αναδεύστε για λίγο ή αναποδογυρίστε τους σωλήνες αρκετές φορές για να αναμειχθούν καλά σε θερμοκρασία δωματίου.
2.Η θερμοκρασία αντίδρασης μπορεί να βελτιστοποιηθεί μεταξύ 62 ℃ και 68 ℃ σύμφωνα με την κατάσταση των εκκινητών.
3.Τα συσκευασμένα αντιδραστήρια δεν πρέπει να εκτίθενται στον αέρα για μεγάλο χρονικό διάστημα.
4.Η αντίδραση αποχρωματισμού κόκκινου και κίτρινου εξαρτάται από την αλλαγή του pH του συστήματος αντίδρασης, μην χρησιμοποιείτε το διάλυμα αποθήκευσης νουκλεϊκού οξέος που περιέχει Tris, συνιστάται η χρήση ddH2O αποθηκευμένο νουκλεϊκό οξύ.
5.Το πείραμα θα πρέπει να είναι τυποποιημένο, συμπεριλαμβανομένης της προετοιμασίας του συστήματος αντίδρασης, της λυοφιλοποίησης και της διαδικασίας επεξεργασίας και προσθήκης δείγματος.
6.Για να αποφευχθεί η μόλυνση, συνιστάται η προετοιμασία του συστήματος αντίδρασης σε έναν εξαιρετικά καθαρό πάγκο, σε άλλα Προσθέστε πρότυπα στον απορροφητήρα καπνού του δωματίου για να αποφύγετε ψευδώς θετικές παρεμβολές.
