Ρνάση Α
Η ριβονουκλεάση Α(RNaseA) είναι ένα μονόκλωνο πολυπεπτίδιο που περιέχει 4 δισουλφιδικούς δεσμούς με μοριακό βάρος περίπου 13,7 kDa.Η RNase είναι μια ενδοριβονουκλεάση που αποικοδομεί ειδικά το μονόκλωνο RNA στα υπολείμματα C και U.Συγκεκριμένα, η διάσπαση αναγνωρίζει τον φωσφοδιεστερικό δεσμό που σχηματίζεται από την 5'-ριβόζη ενός νουκλεοτιδίου και τη φωσφορική ομάδα στην 3'-ριβόζη του γειτονικού νουκλεοτιδίου πυριμιδίνης, έτσι ώστε τα 2,3'-κυκλικά φωσφορικά να υδρολύονται στην αντίστοιχη3 «φωσφορικά νουκλεοζίδια (π.χ., το pG-pG-pC-pA-pG διασπάται από την RNase A για τη δημιουργία pG-pG-pCp και A-PG).Η RNase A είναι η πιο δραστική στη διάσπαση μονόκλωνου RNA.Η συνιστώμενη συγκέντρωση εργασίας είναι 1-100 μ G/mL, συμβατή με διάφορα συστήματα αντίδρασης.Η χαμηλή συγκέντρωση άλατος (0-100 mM NaCl) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την κοπή αλυσίδων μονόκλωνου RNA, δίκλωνου RNA και RNA που σχηματίζονται από υβριδισμό RNA-DNA.
Ωστόσο, σε υψηλή συγκέντρωση άλατος (≥0,3 M), η RNase A διασπά μόνο ειδικά το μονόκλωνο RNA.
Η RNase A χρησιμοποιείται πιο συχνά για την αφαίρεση του RNA κατά την παρασκευή του πλασμιδικού DNA ή του γονιδιωματικού DNA.Το εάν η DNase είναι ενεργή ή όχι κατά τη διαδικασία προετοιμασίας μπορεί εύκολα να επηρεάσει την αντίδραση.Η παραδοσιακή μέθοδος βρασμού σε υδατόλουτρο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την απενεργοποίηση της δραστηριότητας της DNase.Αυτό το προϊόν δεν περιέχει DNase και πρωτεάση και δεν χρειάζεται θερμική επεξεργασία πριν από τη χρήση.Επιπλέον, αυτό το προϊόν μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί σε πειράματα μοριακής βιολογίας, όπως ανάλυση προστασίας RNase και ανάλυση αλληλουχίας RNA.
Συνθήκες αποθήκευσης
Το προϊόν πρέπει να φυλάσσεται στους -25℃~-15℃ για 2 χρόνια.
Προδιαγραφές
| Εμφάνιση | Σκόνη |
| Ποσότητα | 100 mg / 1 g |
| Τύπος Προϊόντος | RNase A |
Οδηγίες
Αυτή είναι μια από τις κοινές μεθόδους για την παρασκευή διαλύματος αποθήκευσης RNase A.Μπορεί επίσης να παρασκευαστείμε άλλες μεθόδους σύμφωνα με τις παραδοσιακές μεθόδους της εργαστηριακής βιβλιογραφίας ή της βιβλιογραφίας αναφοράς (όπωςάμεσα διαλύεται σε διάλυμα Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 ή Tris-NaCl)
1. Χρησιμοποιήστε 10 mM οξικό νάτριο (pH 5,2) για να παρασκευάσετε 10 mg/mL διαλύματος αποθήκευσης RNase A.
2. Θέρμανση στους 100 ℃ για 15 λεπτά.
3. Ψύξτε σε θερμοκρασία δωματίου, προσθέστε 1/10 όγκου 1 M Tris-HCl (pH 7,4), ρυθμίστε το pH στο 7,4 (γιαΓια παράδειγμα, προσθέστε 500 mL διαλύματος αποθήκευσης RNase 10 mg/mL 1 M Tris-HCl, pH7,4).
4. Υποσυσκευασία στους -20℃ για κατεψυγμένη αποθήκευση, η οποία μπορεί να είναι σταθερή για έως και 2 χρόνια.
[Σημειώσεις]:
Όταν βράζει διάλυμα RNaseA υπό ουδέτερες συνθήκες, σχηματίζεται καθίζηση RNase.Το βράζουμε σε χαμηλότερο pH, και αν υπάρχει κατακρήμνιση, μπορεί να παρατηρηθεί, που μπορεί να προκληθεί από την παρουσία πρωτεϊνικών ακαθαρσιών.Εάν εντοπιστεί ίζημα μετά το βρασμό, οι ακαθαρσίες μπορούν να αφαιρεθούν με φυγοκέντρηση υψηλής ταχύτητας (13000 rpm) και στη συνέχεια να υποσυσκευαστούν για αποθήκευση κατάψυξης.
Σημειώσεις
Φορέστε τα απαραίτητα ΜΑΠ, όπως παλτό εργαστηρίου και γάντια, για να διασφαλίσετε την υγεία και την ασφάλειά σας.
