DNase I (Free Rnase) (5u/ul)
Αριθμός γάτας: HC4007A
Η DNase I (δεοξυριβονουκλεάση I) είναι μια ενδοδεοξυριβονουκλεάση που μπορεί να αφομοιώσει το μονόκλωνο ή δίκλωνο DNA.Αναγνωρίζει και διασπά φωσφοδιεστερικούς δεσμούς για να παράγει μονοδεοξυνουκλεοτίδια ή μονόκλωνα ή δίκλωνα ολιγοδεοξυνουκλεοτίδια με φωσφορικές ομάδες στο 5'-άκρο και υδροξύλιο στο 3'-άκρο.Η δραστηριότητα της DNase I εξαρτάται από το Ca2+και μπορεί να ενεργοποιηθεί από δισθενή ιόντα μετάλλων όπως το Mn2+και Zn2+.5 mM Ca2+προστατεύει το ένζυμο από την υδρόλυση.Παρουσία Mg2+, το ένζυμο θα μπορούσε τυχαία να αναγνωρίσει και να διασπάσει οποιαδήποτε θέση σε οποιοδήποτε κλώνο DNA.Παρουσία του Μν2+, οι διπλοί κλώνοι του DNA μπορούν ταυτόχρονα να αναγνωριστούν και να διασπαστούν σχεδόν στην ίδια θέση για να σχηματιστούν θραύσματα DNA επίπεδου άκρου ή θραύσματα DNA κολλώδους άκρου με 1-2 νουκλεοτίδια να προεξέχουν.
Συστατικά
| Ονομα | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, χωρίς RNase | 20μL | 200 μL | 1 mL | 10 mL |
| 10×DNase I Buffer | 1 mL | 1 mL | 5 × 1 mL | 5 × 10 mL |
Συνθήκες αποθήκευσης
-25℃~-15℃ για αποθήκευση.Μεταφορά κάτω από παγοκύστες.
Οδηγίες
1. Παρασκευάστε το διάλυμα αντίδρασης στο σωληνάριο χωρίς RNase σύμφωνα με τις αναλογίες που αναφέρονται παρακάτω:
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, χωρίς RNase (5U/μL) | 1 U ανά μg RNA① |
| ddH2O | Έως 10 μL |
Σημείωση: ① Υπολογίστε τον όγκο της DNase I που πρέπει να προστεθεί με βάση την ποσότητα του RNA.
2. 37 ℃ για 15 λεπτά.
3. Προσθέστε 0,5M EDTA στην τελική συγκέντρωση 2,5mM~5mM και θερμάνετε στους 65℃ για 10 λεπτά για να σταματήσετε την αντίδραση.Το δείγμα μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας για την επόμενη αντίδραση, όπως η αντίστροφη μεταγραφήπείραμα.
Ορισμός μονάδας
Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα του ενζύμου που θα αποικοδομήσει πλήρως 1 μg του pBR322DNA σε 10 λεπτά στους 37℃.
Ελεγχος ποιότητας
RNase:5 U DNase I με 1,6 μg MS2 RNA για 4 ώρες στους 37 ℃ δεν αποδίδει αποικοδόμηση καθώςπροσδιορίζεται με ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης.
Σημειώσεις
1. Παρακαλούμε προετοιμάστε μόνοι σας το 0,5MEDTA.
2. Χρησιμοποιήστε 1U DNase I ανά μg RNA.Ωστόσο, εάν το RNA είναι μικρότερο από 1 μg, χρησιμοποιήστε 1U DNase I.
3. Τοποθετήστε το ένζυμο σε πάγο κατά τη λειτουργία.
