BspQI
Η BspQI μπορεί να εκφραστεί ανασυνδυαστικά σε E. coli που μπορεί να αναγνωρίσει συγκεκριμένες θέσεις και παράγονται υπό
Η BspQI, μια περιοριστική ενδονουκλεάση IIs, προέρχεται από ένα ανασυνδυασμένο στέλεχος Ε. coli που φέρει το κλωνοποιημένο και τροποποιημένο γονίδιο BspQI από τον Bacillus sphaericus.Μπορεί να αναγνωρίσει συγκεκριμένες θέσεις και η αλληλουχία αναγνώρισης και οι θέσεις διάσπασης είναι οι εξής:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Χαρακτηριστικά Προϊόντος
1. Υψηλή δραστηριότητα, γρήγορη πέψη.
2. Χαμηλή δραστηριότητα αστεριών, εξασφαλίζοντας ακριβή κοπή σαν «νυστέρι».
3. Χωρίς BSA και ζωικής προέλευσης.
Ευαισθησία μεθυλίωσης
Dam μεθυλίωση:Μη ευαίσθητο.
Dcm μεθυλίωση:Μη ευαίσθητο.
Μεθυλίωση CpG:Μη ευαίσθητο.
Συνθήκες αποθήκευσης
Το προϊόν πρέπει να αποσταλεί ≤ 0℃.Αποθηκεύστε σε κατάσταση -25~- 15℃.
Αποθηκευτικός χώρος αποθήκευσης
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM διθειοθρεϊτόλη, 500 μg/ml Ανασυνδυασμένη Αλβουμίνη, 0. 1% Trition Χ-100 και 50% γλυκερίνη (ρΗ 7,0 @ 25°C).
Ορισμός μονάδας
Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα ενζύμου που απαιτείται για την πέψη 1 μg DNA εσωτερικού ελέγχου σε 1 ώρα στους 50°C σε συνολικό όγκο αντίδρασης 50 μL.
Ελεγχος ποιότητας
Προσδιορισμός καθαρότητας πρωτεΐνης (SDS-PAGE):Η καθαρότητα του BspQI προσδιορίστηκε με ανάλυση SDS-PAGE ≥95%.
RNase:10 U BspQI με 1,6 μg MS2 RNA για 4 ώρες στους 50 ℃ δεν αποδίδει αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται με ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης.
Μη ειδική δραστηριότητα DNase:10 U BspQI με 1 μg λ DNA στους 50 ℃ για 16 ώρες, σε σύγκριση με 50 ℃ για 1 ώρα, δεν αποδίδει περίσσεια DNA όπως προσδιορίζεται με ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης.
Απολίνωση και κοπή:Μετά από πέψη 1 μg λDNA με 10U BspQI, τα θραύσματα DNA μπορούν να απολινωθούν με λιγάση DNA T4 στους 16ºC.Και αυτά τα συνδεδεμένα θραύσματα μπορούν να κοπούν ξανά με BspQI.
Ε. coli DNA: Η ανίχνευση qPCR TaqMan ειδική για το Ε. coli 16s rDNA έδειξε ότι το υπόλειμμα γονιδιώματος E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Υπολείμματα πρωτεΐνης ξενιστή:≤ 50 ppm
Βακτηριακός Ενδοτοξίνη: Δοκιμή LAL, σύμφωνα με την έκδοση Κινέζικης Φαρμακοποιίας IV 2020, μέθοδος δοκιμής ορίου γέλης, γενικός κανόνας (1143).Η περιεκτικότητα σε βακτηριακή ενδοτοξίνη πρέπει να είναι ≤10 EU/mg.
Σύστημα και συνθήκες αντίδρασης
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| Ρυθμιστικό διάλυμα 10 x BspQ I | 5 μL |
| dd H2O | Έως 50 μL |
Συνθήκες αντίδρασης: 50℃, 1~ 16 h.
Απενεργοποίηση θερμότητας: 80°C για 20 λεπτά.
Το συνιστώμενο σύστημα και οι συνθήκες αντίδρασης μπορούν να παρέχουν σχετικά καλό αποτέλεσμα πέψης ενζύμων, το οποίο είναι μόνο για αναφορά, ανατρέξτε στα πειραματικά αποτελέσματα για λεπτομέρειες.
Εφαρμογή προϊόντος
Πέψη περιοριστικών ενδονουκλεασών, Ταχεία κλωνοποίηση.
Σημειώσεις
1. Ο όγκος του ενζύμου ≤ 1/10 του όγκου της αντίδρασης.
2. Η δραστηριότητα του αστεριού μπορεί να συμβεί όταν η συγκέντρωση γλυκερίνης είναι μεγαλύτερη από 5%.
3. Δραστηριότητα διάσπασης μπορεί να συμβεί όταν το υπόστρωμα είναι κάτω από τη συνιστώμενη αναλογία.
