Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (χωρίς γλυκερόλη)
Η Bst DNA πολυμεράση V2 προέρχεται από Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, η οποία έχει δραστικότητα 5'→3' DNA πολυμεράσης και ισχυρή δράση αντικατάστασης αλυσίδας, αλλά όχι 5'→3' δράση εξωνουκλεάσης.Το Bst DNA Polymerase V2 είναι ιδανικά κατάλληλο για μετατόπιση κλώνου, ισοθερμική ενίσχυση LAMP (Ισοθερμική ενίσχυση μέσω βρόχου) και ταχεία αλληλούχιση.Το Bst DNA polymerase V2 είναι μια έκδοση εν θερμώ που βασίζεται στην Bst DNA πολυμεράση V2 (HC5005A) που λαμβάνεται με τεχνολογία αναστρέψιμης τροποποίησης, η οποία μπορεί να αναστείλει τη δραστηριότητα της DNA πολυμεράσης σε θερμοκρασία δωματίου, έτσι ώστε το σύστημα αντίδρασης να μπορεί να λειτουργήσει και να διαμορφωθεί σε θερμοκρασία δωματίου για να αποτρέψει τη μη -ειδική ενίσχυση και βελτίωση της αποτελεσματικότητας της αντίδρασης και αυτή η έκδοση μπορεί να λυοφιλοποιηθεί.Επιπλέον, η δραστηριότητά του απελευθερώνεται σε υψηλές θερμοκρασίες, επομένως δεν χρειάζεται ξεχωριστό βήμα ενεργοποίησης.
Συστατικά
| Συστατικό | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA πολυμεράση V2 (χωρίς γλυκερόλη) (8U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 mL |
| Ρυθμιστικό διάλυμα 10×HC Bst V2 | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 2×10 mL |
Εφαρμογές
1.Ισοθερμική ενίσχυση LAMP
2.Αντίδραση μονής μετατόπισης κλώνου DNA
3.Αλληλουχία γονιδίου υψηλού GC
4.Αλληλουχία DNA σε επίπεδο νανογραμμάτων.
Κατάσταση Αποθήκευσης
Μεταφορά κάτω από 0°C και αποθήκευση στους -25°C~-15°C.
Ορισμός μονάδας
Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα του ενζύμου που ενσωματώνει 25 nmol dNTP σε αδιάλυτο σε οξύ υλικό σε 30 λεπτά στους 65°C.
Ελεγχος ποιότητας
1.Προσδιορισμός καθαρότητας πρωτεΐνης (SDS-PAGE):Η καθαρότητα της Bst DNA πολυμεράσης V2 προσδιορίζεται ≥99% με ανάλυση SDS-PAGE χρησιμοποιώντας ανίχνευση Coomassie Blue.
2.EντονουκλεάσηΔραστηριότητα:Η επώαση μιας αντίδρασης 50 μL που περιέχει τουλάχιστον 8 U Bst DNA πολυμεράσης V2 με 1 μg λDNA για 16 ώρες στους 37 ℃ οδηγεί σε μη ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
3.Δραστηριότητα εξωνουκλεάσης:Η επώαση μιας αντίδρασης 50 μL που περιέχει τουλάχιστον 8 U Bst DNA πολυμεράσης V2 με 1 μg λ-Hind Ⅲ DNA πέψεως για 16 ώρες στους 37 ℃ δεν έχει ως αποτέλεσμα την ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
4.Δραστηριότητα Nickase:Η επώαση μιας αντίδρασης 50 μL που περιέχει τουλάχιστον 8 U Bst DNA πολυμεράσης V2 με 1 μg pBR322 DNA για 16 ώρες στους 37°C δεν έχει ως αποτέλεσμα την ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
5.Δραστηριότητα RNase:Η επώαση μιας αντίδρασης 50 μL που περιέχει τουλάχιστον 8 U Bst DNA πολυμεράσης V2 με 1,6 μg MS2 RNA για 16 ώρες στους 37°C δεν οδηγεί σε ανιχνεύσιμη αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται.
6.Ε. coliDNA:120 U Bst DNA πολυμεράσης V2 εξετάζονται για την παρουσία γονιδιωματικού DNA του Ε. coli χρησιμοποιώντας TaqMan qPCR με εκκινητές ειδικούς για τον τόπο του Ε. coli 16S rRNA.Η μόλυνση του γονιδιωματικού DNA του E. coli είναι ≤1 αντίγραφο.
ΛΑΜΠΑ Αντίδραση
| Συστατικά | 25μL |
| Ρυθμιστικό διάλυμα 10×HC Bst V2 | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTP (10mM το καθένα) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Πράσινο (25×)a | 1,0 μL |
| Μίγμα ασταριούb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (χωρίς γλυκερόλη) (8 U/uL) | 1 μL |
| Πρότυπο | × μL |
| ddH2O | Έως 25 μL |
Σημειώσεις:
1) α.SYTOTM 16 Πράσινο (25×): Σύμφωνα με τις πειραματικές ανάγκες, άλλες βαφές μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως υποκατάστατα.
2) β.Μίγμα εκκινητών: λαμβάνεται με ανάμειξη 20 μΜ FIP, 20 μΜ ΒΙΡ, 2,5 μΜ F3, 2,5 μΜ Β3, 5 μΜ LF, 5 μΜ LB και άλλων όγκων.
Αντίδραση και Κατάσταση
Ρυθμιστικό διάλυμα 1 × HC Bst V2, η θερμοκρασία επώασης είναι μεταξύ 60°C και 65°C.
Απενεργοποίηση θερμότητας
80°C, 20 λεπτά
