Ultra Nuclease
Το UltraNuclease είναι ένα γενετικά τροποποιημένο ενδονουκλάσιο που προέρχεται από το Serratia marcescens, το οποίο είναι ικανό να αποικοδομεί DNA ή RNA, είτε δίκλωνο είτε μονόκλωνο, γραμμικό ή κυκλικό κάτω από ένα ευρύ φάσμα συνθηκών, να αποικοδομεί πλήρως τα νουκλεϊκά οξέα σε 5'-μονοφωσφορικά ολιγονουκλεοτίδια μήκους με 3-5 βασικά .Μετά από τροποποίηση γενετικής μηχανικής, το προϊόν ζυμώθηκε, εκφράστηκε και καθαρίστηκε σε Escherichia coli (E. coli), το οποίο μειώνει το ιξώδες του υπερκειμένου κυττάρου και του κυτταρολύματος επιστημονικής έρευνας, αλλά βελτιώνει επίσης την αποτελεσματικότητα καθαρισμού και τη λειτουργική έρευνα της πρωτεΐνης.Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί στη γονιδιακή θεραπεία, τον καθαρισμό ιών, την παραγωγή εμβολίων, τη φαρμακευτική βιομηχανία πρωτεϊνών και πολυσακχαριτών ως αντιδραστήριο αφαίρεσης υπολειμμάτων νουκλεϊκού οξέος ξενιστή.
Χαρακτηριστικά Προϊόντος
| CAS Αρ. | 9025-65-4 |
| ΕΚ αριθ. | |
| Μοριακό βάρος | 30 kDa |
| Ισοηλεκτρικό Σημείο | 6,85 |
| Καθαρότητα πρωτεΐνης | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Συγκεκριμένη Δραστηριότητα | ≥1.1×106 U/mg |
| Βέλτιστη Θερμοκρασία | 37°C |
| Βέλτιστο pH | 8.0 |
| Protease Activity | αρνητικός |
| Βιολογικό φορτίο | ＜10CFU/100.000U |
| Υπολειμματική Πρωτεΐνη Κυττάρου Ξενιστή | ≤10 ppm |
| Βαρέων μετάλλων | ≤10 ppm |
| Βακτηριακή Ενδοτοξίνη | ＜0,25EU/1000U |
| Buffer αποθήκευσης | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% γλυκερίνη |
Συνθήκες αποθήκευσης
Μεταφορά ≤0°C；-25~-15°C Αποθήκευση，2 χρόνια ισχύος (αποφυγή κατάψυξης-απόψυξης).
Ορισμός μονάδας
Η ποσότητα του ενζύμου που χρησιμοποιήθηκε για την αλλαγή της τιμής απορρόφησης του △A260 κατά 1,0 εντός 30 λεπτών στους 37 °C, pH 8,0, ισοδύναμο με χωνεμένο 37 μg DNA σπέρματος σολομού με κοπή σε ολιγονουκλεοτίδια, ορίστηκε ως ενεργή μονάδα (U).
Ελεγχος ποιότητας
Υπολειμματική Πρωτεΐνη Κυττάρου Ξενιστή: κιτ ELISA
•Πρωτεάση Υπολείμματα: 250 KU/mL UltraNuclease αντέδρασε με υπόστρωμα για 60 λεπτά, δεν ανιχνεύθηκε δραστηριότητα.
•Βακτηριακή Ενδοτοξίνη: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China, Τόμος 4 (Έκδοση 2020) Μέθοδος δοκιμής ορίου γέλης.Γενικοί Κανόνες (1143).
•Βιολογικό φορτίο: Φαρμακοποιία της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας Τόμος 4 (έκδοση 2020) — Γενικά
Rules for Sterility Test (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Βαρέων μετάλλων:ICP-AES, HJ776-2015.
Λειτουργία
Η δράση UltraNuclease αναστέλλεται σημαντικά όταν η συγκέντρωση SDS ήταν πάνω από 0,1% ή EDTA
Η συγκέντρωση ήταν πάνω από 1 mM. Τασιενεργό Triton X-100, Tween 20 και Tween 80 δεν είχαν καμία επίδραση στη νουκλεάση
ιδιότητες όταν η συγκέντρωση ήταν κάτω από 1,5%.
| Λειτουργία | Βέλτιστη λειτουργία | Έγκυρη λειτουργία |
| Θερμοκρασία | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1- 15 mM |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-Μερκαπτοαιθανόλη | 0-100mM | >100mM |
| Μονοσθενές μεταλλικό ιόν (Na+, K+ κ.λπ.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100mM |
Χρήση και Δοσολογία
• Αφαιρέστε το εξωγενές νουκλεϊκό οξύ από τα προϊόντα εμβολίων, μειώστε τον κίνδυνο υπολειμματικής τοξικότητας νουκλεϊκού οξέος και βελτιώστε την ασφάλεια του προϊόντος.
• Μειώστε το ιξώδες του υγρού τροφοδοσίας που προκαλείται από το νουκλεϊκό οξύ, συντομεύστε το χρόνο επεξεργασίας και αυξήστε την απόδοση πρωτεΐνης.
• Αφαιρέστε το νουκλεϊκό οξύ που περιτυλίχθηκε το σωματίδιο (ιός, σώμα εγκλεισμού κ.λπ.), το οποίο είναι ευνοϊκό
για την απελευθέρωση και τον καθαρισμό του σωματιδίου.
| Πειραματικός τύπος | Παραγωγή Πρωτεϊνών | Ιός, εμβόλιο | Κυτταρικά φάρμακα |
| Αριθμός κελιών | 1g υγρού βάρους κυττάρων (Επαναιώρημα με ρυθμιστικό διάλυμα 10 ml) | 1L ζύμωση υγρό υπερκείμενο | Καλλιέργεια 1L |
| Ελάχιστη Δοσολογία | 250 U | 100U | 100U |
| Συνιστώμενη Δοσολογία | 2500U | 25000U | 5000U |
• Η επεξεργασία με νουκλεάση μπορεί να βελτιώσει την ανάλυση και την ανάκτηση του δείγματος για χρωματογραφία στήλης, ηλεκτροφόρηση και ανάλυση στύπωσης.
• Στη γονιδιακή θεραπεία, το νουκλεϊκό οξύ αφαιρείται για να ληφθούν καθαρισμένοι αδενο-σχετιζόμενοι ιοί.
