DNase I
Η DNase I (δεοξυριβονουκλεάση I) είναι μια ενδοδεοξυριβονουκλεάση που μπορεί να αφομοιώσει το μονόκλωνο ή δίκλωνο DNA.Αναγνωρίζει και διασπά φωσφοδιεστερικούς δεσμούς για να παράγει μονοδεοξυνουκλεοτίδια ή μονόκλωνα ή δίκλωνα ολιγοδεοξυνουκλεοτίδια με φωσφορικές ομάδες στο 5'-άκρο και υδροξύλιο στο 3'-άκρο.Η δραστικότητα της DNase I εξαρτάται από το Ca2+ και μπορεί να ενεργοποιηθεί από δισθενή μεταλλικά ιόντα όπως Mn2+ και Zn2+.Το 5mM Ca2+ προστατεύει το ένζυμο από την υδρόλυση.Παρουσία Mg2+, το ένζυμο θα μπορούσε τυχαία να αναγνωρίσει και να διασπάσει οποιαδήποτε θέση σε οποιονδήποτε κλώνο DNA.Παρουσία Mn2+, οι διπλοί κλώνοι του DNA μπορούν ταυτόχρονα να αναγνωριστούν και να διασπαστούν σχεδόν στην ίδια θέση για να σχηματιστούν θραύσματα DNA επίπεδου άκρου ή θραύσματα DNA κολλώδους άκρου με 1-2 νουκλεοτίδια να προεξέχουν.
Ιδιότητα προϊόντος
Βόειο πάγκρεας DNase Ι εκφράστηκε σε σύστημα έκφρασης ζυμομύκητα και καθαρίστηκε.
Cεξαρτήματα
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNase I, χωρίς RNase | 20μL | 200 μL | 1 mL | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 mL | 1 mL | 5× 1mL | 5×10mL |
Μεταφορά και αποθήκευση
1. Σταθερότητα αποθήκευσης: – 15℃~-25℃ για αποθήκευση.
2.Σταθερότητα μεταφοράς: Μεταφορά κάτω από παγοκύστες.
3. Παρέχεται σε: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% γλυκερίνη, pH 7,6 στους 25℃.
Ορισμός μονάδας
Μία μονάδα ορίζεται ως η ποσότητα του ενζύμου που θα αποικοδομήσει πλήρως 1 μg DNA του pBR322 σε 10 λεπτά στους 37°C.
Ελεγχος ποιότητας
RNase:5 U DNase I με 1,6 μg MS2 RNA για 4 ώρες στους 37 ℃ δεν αποδίδει αποικοδόμηση όπως προσδιορίζεται με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης.
Βακτηριακός Ενδοτοξίνη:Δοκιμή LAL, σύμφωνα με την έκδοση Κινέζικης Φαρμακοποιίας IV 2020, μέθοδος δοκιμής ορίου γέλης, γενικός κανόνας (1143).Η περιεκτικότητα σε βακτηριακή ενδοτοξίνη πρέπει να είναι ≤10 EU/mg.
Οδηγίες χρήσης
1.Παρασκευάστε το διάλυμα αντίδρασης στο σωληνάριο χωρίς RNase σύμφωνα με τις αναλογίες που αναφέρονται παρακάτω:
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, χωρίς RNase (5U/μL) | 1 U ανά μg RNA |
| ddH2O | Έως 10 μL |
2,37 ℃ για 15 λεπτά.
3. Προσθέστε το ρυθμιστικό τερματισμού για να σταματήσετε την αντίδραση και θερμαίνετε στους 65℃ για 10 λεπτά για να απενεργοποιήσετε τη DNase I. Το δείγμα μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας για το επόμενο πείραμα μεταγραφής.
Σημειώσεις
1.Χρησιμοποιήστε 1U DNase I ανά μg RNA ή 1U DNase I για λιγότερο από 1μg RNA.
2. EDTA θα πρέπει να προστεθεί σε τελική συγκέντρωση 5 mM για να προστατεύσει το RNA από την αποικοδόμηση κατά την απενεργοποίηση του ενζύμου.
