Αλκαλική Φωσφατάση (ALP)

Η αλκαλική φωσφατάση προέρχεται από ένα ανασυνδυασμένο στέλεχος E. coli που φέρει το γονίδιο TAB5.Το ένζυμο καταλύει την αποφωσφορυλίωση των 5' και 3' άκρων των φωσφομονοεστέρων DNA και RNA.Επίσης, υδρολύει ριβόζη, καθώς και τριφωσφορικούς δεοξυριβονουκλεοζίτες (NTPs και dNTPs).Η αλκαλική φωσφατάση TAB5 δρα σε 5' προεξέχοντα, 5' εσοχή και αμβλεία άκρα.Η Φωσφατάση μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε πολλές εφαρμογές μοριακής βιολογίας, όπως η κλωνοποίηση ή η επισήμανση άκρου ανιχνευτή για την αφαίρεση των φωσφορυλιωμένων άκρων του DNA ή του RNA.Σε πειράματα κλωνοποίησης, η αποφωσφορυλίωση εμποδίζει το γραμμικοποιημένο πλασμιδιακό DNA από την αυτο-σύνδεση.Μπορεί επίσης να αποικοδομήσει μη ενσωματωμένα dNTP σε αντιδράσεις PCR για να προετοιμάσει ένα πρότυπο για την αλληλουχία DNA.Το ένζυμο απενεργοποιείται πλήρως και μη αναστρέψιμα με θέρμανση στους 70°C για 5 λεπτά, καθιστώντας έτσι περιττή την αφαίρεση της φωσφατάσης πριν από την απολίνωση ή την επισήμανση του άκρου.